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Métodos optogenéticos para registrar la actividad celular

La optogenética comenzó con métodos para alterar la actividad neuronal mediante la luz, utilizando, por ejemplo, canalrodopsinas . En un sentido más amplio, los enfoques optogen...

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La optogenética comenzó con métodos para alterar la actividad neuronal mediante la luz, utilizando, por ejemplo, canalrodopsinas . En un sentido más amplio, los enfoques optogenéticos también incluyen el uso de biosensores genéticamente codificados para monitorizar la actividad de neuronas u otros tipos celulares midiendo la fluorescencia o la bioluminiscencia , aunque estas técnicas precedieron sustancialmente al primer uso del término optogenética. Los indicadores de calcio genéticamente codificados (GECI) se utilizan con frecuencia para monitorizar la actividad neuronal, pero también se pueden registrar ópticamente otros parámetros celulares como el potencial de membrana o la actividad de segundos mensajeros. El uso de sensores optogenéticos no se limita a la neurociencia , sino que desempeña un papel cada vez más importante en la inmunología , la cardiología y la investigación del cáncer .

Historia

Los primeros experimentos para medir los niveles de calcio intracelular mediante la expresión de proteínas se basaron en la aequorina , una proteína bioluminiscente de la medusa Aequorea . Sin embargo, para producir luz, esta enzima necesita el compuesto "combustible" coelenteracina , que debe añadirse a la preparación. Esto no es práctico en animales intactos y, además, la resolución temporal de la imagen de bioluminiscencia es relativamente baja (segundos-minutos). El primer indicador de calcio fluorescente codificado genéticamente (GECI) que se utilizó para obtener imágenes de la actividad en un animal fue Cameleon , diseñado por Atsushi Miyawaki, Roger Tsien y colaboradores en 1997. [ 1 ] Cameleon fue utilizado por primera vez con éxito en un animal por Rex Kerr, William Schafer y colaboradores para registrar la actividad de neuronas y células musculares del nematodo C. elegans . [ 2 ] Posteriormente, Cameleon se utilizó para registrar la actividad neuronal en moscas [ 3 ] y peces cebra. [ 4 ] En mamíferos, el primer GECI que se utilizó in vivo fue GCaMP , [ 5 ] desarrollado por primera vez por Junichi Nakai y colaboradores en 2001. [ 6 ] GCaMP ha experimentado numerosas mejoras, en particular por un equipo de científicos en el Janelia Farm Research Campus (proyecto GENIE, HHMI ), y GCaMP6 [ 7 ] en particular se ha vuelto ampliamente utilizado en neurociencia.

Curiosamente, el primer indicador de voltaje codificado genéticamente (GEVI), FLaSh, también se informó en 1997, el mismo año que Cameleon [ 8 ] . FLaSh era una inserción de proteína fluorescente verde (GFP) en un canal de potasio dependiente de voltaje , pero encontró problemas de expresión en neuronas [ 9 ] . Desde entonces, se han desarrollado numerosas proteínas GEVI basadas en mutantes de canalrodopsina no conductores o en la inserción de GFP en dominios aislados de detección de voltaje, y se han utilizado ampliamente en moscas, peces cebra y mamíferos [ 10 ] . Recientemente, se han aprovechado los receptores acoplados a proteínas G para generar una serie de indicadores altamente específicos para varios neurotransmisores [ 11 , 12 ] .

Principios de diseño

Los sensores codificados genéticamente son proteínas de fusión , que constan de un dominio de unión al ligando (sensor) y una proteína fluorescente , unidos por un corto enlazador (péptido flexible). Cuando el dominio del sensor se une al ligando correcto, cambia de conformación. Este movimiento se transfiere a la proteína fluorescente y la deformación resultante produce un cambio en la fluorescencia. La eficiencia de este proceso depende críticamente de la longitud de la región del enlazador, que debe optimizarse en un proceso laborioso. La proteína fluorescente suele estar permutada circularmente, es decir, se crean nuevos extremos C-terminal y N-terminal . Los sensores de una sola longitud de onda son fáciles de usar para mediciones cualitativas, pero difíciles de calibrar para mediciones cuantitativas de la concentración del ligando. Una excepción notable son los biosensores de calcio de tiempo de vida [ 13 ] que son adecuados para FLIM .

Una segunda clase de sensores se basa en la transferencia de energía por resonancia de Förster (FRET) entre dos proteínas fluorescentes (FP) de diferente color. La FP de menor longitud de onda (donante) se excita con luz azul de un láser o LED. Si la segunda FP (aceptor) está muy cerca, la energía se transfiere al aceptor, lo que produce fluorescencia amarilla o roja. Cuando la FP aceptora se aleja, el donante emite fluorescencia verde. El dominio sensor se suele empalmar entre las dos FP, lo que produce un movimiento de bisagra al unirse el ligando, modificando así la distancia entre el donante y el aceptor. El procedimiento de imagen es más complejo para los sensores FRET, pero la relación de fluorescencia se puede calibrar para medir la concentración absoluta de un ligando. También es posible la lectura mediante imagen de tiempo de vida de fluorescencia (FLIM) de la fluorescencia del donante, ya que el proceso FRET acelera la desintegración de la fluorescencia.

Ventajas de los sensores optogenéticos

  • Se puede dirigir a clases específicas de células (por ejemplo, astrocitos o células piramidales ). Esto permite la lectura óptica sin resolución espacial, por ejemplo, fotometría de fibra de áreas profundas del cerebro. [ 14 ]
  • Se puede dirigir a compartimentos subcelulares (por ejemplo, sinapsis, orgánulos , núcleo) mediante la fusión de la proteína indicadora con dominios de anclaje específicos, señales de retención o intracuerpos .
  • Trabajamos con diversas especies ( nematodos , insectos, peces, mamíferos) y en sistemas de cultivo celular ( ensayo FLIPR ).
  • pueden administrarse mediante vectores virales (por ejemplo, rAAV ).
  • puede utilizarse para registrar la actividad de miles de neuronas al mismo tiempo [ 15 ]

Figuras de mérito

Al diseñar o comparar indicadores, los siguientes parámetros son importantes:

  • Brillo, rendimiento cuántico : ¿Cuántos fotones obtengo de una molécula indicadora? ¡Cuanto más brillante, mejor!
  • Rango dinámico : ¿Cuál es la diferencia de brillo entre la forma ligada y no ligada del indicador? Un amplio rango dinámico es deseable, pero conlleva el problema práctico de que la celda puede ser invisible en reposo.
  • Afinidad : ¿Qué concentración de ligando satura el 50% de mi indicador?
  • Cinética : La cinética rápida es muy importante para las señales de corta duración, por ejemplo, los transitorios de glutamato en la hendidura sináptica. [ 16 ]
  • Coeficiente de Hill : ¿Necesita una respuesta de fluorescencia gradual y casi lineal para cuantificar la concentración del ligando? Busque un coeficiente de Hill = 1 y manténgase muy por debajo de K D. ¿ Desea un comportamiento tipo interruptor para detectar eventos específicos, por ejemplo, potenciales de acción ? Busque un coeficiente de Hill alto (múltiples sitios de unión cooperativos, por ejemplo, calmodulina ) y no se preocupe por la saturación del indicador.
  • Nivel de expresión: Determinado principalmente por el promotor utilizado para impulsar la expresión. Puede mejorarse mediante la optimización de codones .

Desventajas, limitaciones

Indicadores codificados genéticamente

Clases de indicadores codificados genéticamente

Estructura de GCaMP
El indicador de calcio GCaMP en su forma unida a calcio (arriba) y libre de calcio (abajo). Cuando la Ca- calmodulina (cian) se une a M13, la conformación cambia y el barril de cpGFP se cierra, lo que permite la fluorescencia verde.

Se han diseñado indicadores para medir concentraciones de iones, potencial de membrana, neurotransmisores y diversas moléculas de señalización intracelular. Rohner et al. (2024) publicaron una revisión de indicadores basados ​​en GPCR para neuromoduladores [ 12 ]. La siguiente lista proporciona solo ejemplos para cada clase; se han publicado muchos más.

Señalización intracelular

Neurotransmisores y otras señales extracelulares

Bases de datos de biosensores fluorescentes

Se están creando y publicando bases de datos de biosensores fluorescentes donde se enumeran cientos de estas proteínas de fusión. Entre esas bases de datos se encuentran:

  • Base de datos de biosensores fluorescentes , una lista de búsqueda bastante completa de sensores publicados y sus propiedades básicas, mantenida por el laboratorio de Jin Zhang en la UCSD. [ 40 ]
  • Biosensores fluorescentes disponibles en Addgene , un repositorio de plásmidos sin ánimo de lucro.

Referencias

  1. ^ Miyawaki A, Llopis J, Heim R, McCaffery JM, Adams JA, Ikura M, Tsien RY (agosto de 1997). "Indicadores fluorescentes de Ca2+ a base de proteínas verdes fluorescentes y calmodulina" . Naturaleza . 388 (6645): 882– 887. Bibcode : 1997Natur.388..882M . doi : 10.1038/42264 . PMID 9278050 . S2CID 13745050 .  
  2. ↑ Kerr R, Lev-Ram V, Baird G, Vincent P, Tsien RY, Schafer WR (junio de 2000). " Imágenes ópticas de transitorios de calcio en neuronas y músculo faríngeo de C. elegans" . Neuron . 26 (3): 583– 594. doi : 10.1016/s0896-6273(00)81196-4 . PMID 10896155. S2CID 311998 .  
  3. ↑ Fiala A, Spall T, Diegelmann S, Eisermann B, Sachse S, Devaud JM, et al. (octubre de 2002). "El gen cameleon expresado genéticamente en Drosophila melanogaster se utiliza para visualizar información olfativa en neuronas de proyección" . Current Biology . 12 (21): 1877– 1884. Bibcode : 2002CBio...12.1877F . doi : 10.1016/s0960-9822(02) 01239-3 . PMID 12419190. S2CID 6312049 .   
  4. ↑ Higashijima S, Masino MA, Mandel G, Fetcho JR (diciembre de 2003). "Imágenes de la actividad neuronal durante el comportamiento del pez cebra con un indicador de calcio codificado genéticamente". Journal of Neurophysiology . 90 (6): 3986– 3997. doi : 10.1152/jn.00576.2003 . PMID 12930818. S2CID 2230173 .  
  5. ↑ Ji G, Feldman ME, Deng KY, Greene KS, Wilson J, Lee JC, et al. (mayo de 2004). "Ratones transgénicos sensibles al Ca2+: señalización postsináptica en el músculo liso" . The Journal of Biological Chemistry . 279 (20): 21461– 21468. doi : 10.1074/jbc.M401084200 . PMID 14990564 .  
  6. ↑ Nakai J, Ohkura M, Imoto K (febrero de 2001). "Una sonda de Ca(2+) con alta relación señal/ruido compuesta por una sola proteína fluorescente verde". Nature Biotechnology . 19 (2): 137– 141. Bibcode : 2001NatBi..19..137N . doi : 10.1038 / 84397 . PMID 11175727. S2CID 30254550 .  
  7. ↑ Chen TW, Wardill TJ, Sun Y, Pulver SR, Renninger SL, Baohan A, et al. (julio de 2013). "Proteínas fluorescentes ultrasensibles para la obtención de imágenes de la actividad neuronal" . Nature . 499 (7458): 295–300 . Bibcode : 2013Natur.499..295C . doi : 10.1038/ nature12354 . PMC 3777791. PMID 23868258 .   
  8. ↑ Siegel, Micah S; Isacoff, Ehud Y (1997). "Una sonda óptica codificada genéticamente del voltaje de membrana" . Neuron . 19 (4): 735– 741. doi : 10.1016/S0896-6273(00)80955-1 .
  9. ↑ Akemann, Walther; Song, Chenchen; Mutoh, Hiroki; Knöpfel, Thomas (2015-01-14). "Ruta hacia la electrofisiología óptica dirigida genéticamente: desarrollo y aplicaciones de proteínas fluorescentes sensibles al voltaje" . Neurophotonics . 2 ( 2) 021008. doi : 10.1117/1.NPh.2.2.021008 . ISSN 2329-423X . PMC 4465821. PMID 26082930 .   
  10. ↑ Lin, Michael Z; Schnitzer, Mark J (2016). " Indicadores codificados genéticamente de la actividad neuronal" . Nature Neuroscience . 19 (9): 1142– 1153. doi : 10.1038/nn.4359 . ISSN 1097-6256 . PMC 5557009. PMID 27571193 .   
  11. ↑ Ravotto L, Duffet L, Zhou X, Weber B, Patriarchi T (2020). "Un futuro brillante y colorido para los sensores de receptores acoplados a proteínas G" . Frontiers in Cellular Neuroscience . 14 67. doi : 10.3389/fncel.2020.00067 . PMC 7098945. PMID 32265667 .  
  12. 1 2 Rohner, Valentin Lu; Lamothe-Molina, Paul J.; Patriarchi, Tommaso (2024-01-30). "Ingeniería, aplicaciones y perspectivas futuras de indicadores fluorescentes codificados genéticamente basados ​​en GPCR para neuromoduladores" . Journal of Neurochemistry . 168 (3): 163– 184. doi : 10.1111/jnc.16045 . hdl : 20.500.11850/659388 . ISSN 0022-3042 . PMID 38288673 .  
  13. ↑ van der Linden, Franka H; Thornquist, Stephen C; ter Beek, Rick M; Huijts, Jelle Y; Hink, Mark A; Gadella, Theodorus WJ; Maimon, Gaby; Goedhart, Joachim (2025-12-19). "Un biosensor de vida útil verde para calcio que permanece brillante en todo su rango dinámico" . eLife . 14 RP105086 . doi : 10.7554/eLife.105086.3 . ISSN 2050-084X . PMC 12716836. PMID 41416770 .   
  14. ↑ Jones-Tabah J, Mohammad H, Hadj-Youssef S, Kim LE, Martin RD, Benaliouad F, et al. (septiembre de 2020). "Señalización del receptor de dopamina D1 en ratas parkinsonianas discinéticas revelada por fotometría de fibra utilizando biosensores basados ​​en FRET" . Scientific Reports . 10 (1) 14426. Bibcode : 2020NatSR..1014426J . doi : 10.1038/s41598-020-71121-8 . PMC 7468292. PMID 32879346 .   
  15. ↑ Sofroniew NJ (septiembre de 2017). " Preguntas y respuestas: El cerebro bajo un mesoscopio: el bosque y los árboles" . BMC Biology . 15 (1) 82. doi : 10.1186/s12915-017-0426-y . PMC 5598035. PMID 28911321 .  
  16. ↑ Helassa, Nordine; Dürst, Céline D.; Coates, Catherine; Kerruth, Silke; Arif, Urwa; Schulze, Christian; Wiegert, J. Simon; Geeves, Michael; Oertner, Thomas G.; Török, Katalin (2018-05-22). "Los sensores ultrarrápidos de glutamato resuelven la liberación de alta frecuencia en las sinapsis colaterales de Schaffer" . Actas de la Academia Nacional de Ciencias . 115 (21): 5594– 5599. doi : 10.1073/pnas.1720648115 . ISSN 0027-8424 . PMC 6003469. PMID 29735711 .   
  17. ↑ Pulin M, Stockhausen KE, Masseck OA, Kubitschke M, Busse B, Wiegert JS, Oertner TG (febrero de 2022). "Excitación polarizada ortogonalmente para mejorar la microscopía de dos fotones y de generación de segundo armónico, aplicada a la obtención de imágenes de neurotransmisores con sensores basados ​​en GPCR" . Biomedical Optics Express . 13 (2): 777–790 . doi : 10.1364/BOE.448760 . PMC 8884218. PMID 35284188 .  
  18. ^ Zhang Y, Rózsa M, Bushey D, Zheng J, Reep D, Broussard GJ, Tsang A, Tsegaye G, Patel R, Narayan S, Lim JX (2020). "Indicadores rápidos de calcio codificados genéticamente jGCaMP8". Campus de investigación Janelia : 361685. doi : 10.25378/JANELIA.13148243 .
  19. ↑ Berglund K, Schleich W, Wang H, Feng G, Hall WC, Kuner T, Augustine GJ (agosto de 2008). "Imágenes de la inhibición sináptica en todo el cerebro mediante Clomeleon dirigido genéticamente" . Brain Cell Biology . 36 ( 1–4 ): 101–118 . doi : 10.1007/s11068-008-9031-x . PMC 2674236. PMID 18850274 .  
  20. ^ Wu, Sheng-Yi; Wen, Yurong; Serre, Nelson antes de Cristo; Laursen, Cathrine Charlotte Heiede; Dietz, Andrea Grostøl; Taylor, Brian R.; Drobizhev, Mikhail; Molina, Rosana S.; Aggarwal, Abhi; Rancic, Vladimir; Becker, Michael; Ballanyi, Klaus; Podgorski, Kaspar; Hirase, Hajime; Nedergaard, Maiken (6 de septiembre de 2022). Dutzler, Raimund (ed.). "Un biosensor de iones de potasio codificado genéticamente sensible y específico para aplicaciones in vivo en todo el árbol de la vida" . Más biología . 20 (9) e3001772. doi : 10.1371/journal.pbio.3001772 . ISSN 1545-7885 . PMC 9481166 . PMID 36067248 .   
  21. ↑ Han J, Burgess K (mayo de 2010). "Indicadores fluorescentes para el pH intracelular". Chemical Reviews . 110 (5): 2709– 2728. doi : 10.1021/cr900249z . PMID 19831417 . 
  22. ↑ Hao, Yukun A.; Lee, Sungmoo; Roth, Richard H.; Natale, Silvia; Gomez, Laura; Taxidis, Jiannis; O'Neill, Philipp S.; Villette, Vincent; Bradley, Jonathan; Wang, Zeguan; Jiang, Dongyun; Zhang, Guofeng; Sheng, Mengjun; Lu, Di; Boyden, Edward (2024-11-20). "Un indicador de voltaje rápido y sensible con sensibilidad mejorada para eventos sinápticos unitarios" . Neuron . 112 ( 22): 3680–3696.e8. doi : 10.1016/j.neuron.2024.08.019 . ISSN 0896-6273 . PMC 11581914. PMID 39305894 .   
  23. ^ Kannan, Madhuvanthi; Vasan, Ganesha; Haziza, Simón; Huang, Cheng; Chrapkiewicz, Radosław; Luo, Junjie; Cardín, Jessica A.; Schnitzer, Mark J.; Pieribone, Vicente A. (4 de noviembre de 2022). "Imágenes de voltaje de doble polaridad de la dinámica concurrente de múltiples tipos de neuronas" . Ciencia . 378 (6619). doi : 10.1126/science.abm8797 . ISSN 0036-8075 . PMC 9703638 . PMID 36378956 .   
  24. ↑ Granseth B, Odermatt B, Royle SJ, Lagnado L (septiembre de 2006). "La endocitosis mediada por clatrina es el mecanismo dominante de recuperación de vesículas en las sinapsis del hipocampo" . Neuron . 51 ( 6): 773–786 . doi : 10.1016/j.neuron.2006.08.029 . PMID 16982422. S2CID 921124 .  
  25. ↑ Klarenbeek J, Goedhart J, van Batenburg A, Groenewald D, Jalink K (2015-04-14). "Los sensores FRET de cuarta generación basados ​​en epac para cAMP presentan un brillo, fotoestabilidad y rango dinámico excepcionales: caracterización de sensores dedicados para FLIM, para ratiometría y con alta afinidad" . PLOS ONE . 10 (4) e0122513. Bibcode : 2015PLoSO..1022513K . doi : 10.1371/journal.pone.0122513 . PMC 4397040. PMID 25875503 .  
  26. ↑ Yaginuma H, Okada Y (2021-10-09). "Imágenes de células vivas de heterogeneidad metabólica mediante la proteína indicadora de ATP fluorescente cuantitativa, QUEEN-37C". bioRxiv 10.1101/2021.10.08.463131 . 
  27. ↑ Lee SJ, Escobedo-Lozoya Y, Szatmari EM, Yasuda R (marzo de 2009). "Activación de CaMKII en espinas dendríticas individuales durante la potenciación a largo plazo" . Nature . 458 ( 7236): 299–304 . Bibcode : 2009Natur.458..299L . doi : 10.1038/nature07842 . PMC 2719773. PMID 19295602 .  
  28. ↑ Oliveira AF, Yasuda R (2013-01-14). "Un sensor Ras mejorado para imágenes FRET-FLIM altamente sensibles y cuantitativas" . PLOS ONE . 8 (1) e52874. Bibcode : 2013PLoSO...852874O . doi : 10.1371/journal.pone.0052874 . PMC 3544822. PMID 23349692 .  
  29. ↑ Marvin JS, Scholl B, Wilson DE, Podgorski K, Kazemipour A, Müller JA, et al. (noviembre de 2018). " Estabilidad, afinidad y variantes cromáticas del sensor de glutamato iGluSnFR" . Nature Methods . 15 (11): 936–939 . doi : 10.1038/s41592-018-0171-3 . PMC 6394230. PMID 30377363 .   
  30. ^ Marvin JS, Shimoda Y, Magloire V, Leite M, Kawashima T, Jensen TP y col. (agosto de 2019). "Un sensor fluorescente codificado genéticamente para obtener imágenes in vivo de GABA". Métodos de la naturaleza . 16 (8): 763– 770. doi : 10.1038/s41592-019-0471-2 . PMID 31308547 . S2CID 196812412 .   
  31. ↑ Patriarchi T, Cho JR, Merten K, Howe MW, Marley A, Xiong WH, et al. (junio de 2018). " Imágenes neuronales ultrarrápidas de la dinámica de la dopamina con sensores genéticamente codificados diseñados" . Science . 360 (6396) eaat4422. doi : 10.1126/science.aat4422 . PMC 6287765. PMID 29853555 .   
  32. ↑ Labouesse MA, Cola RB, Patriarchi T (octubre de 2020). "Sensores de dopamina basados ​​en GPCR: una guía detallada para informar la elección de sensores para imágenes in vivo" . International Journal of Molecular Sciences . 21 (21): 8048. doi : 10.3390/ijms21218048 . PMC 7672611. PMID 33126757 .  
  33. ↑ Wan J, Peng W, Li X, Qian T, Song K, Zeng J, et al. (mayo de 2021). " Un sensor codificado genéticamente para medir la dinámica de la serotonina" . Nature Neuroscience . 24 (5): 746– 752. doi : 10.1038/s41593-021-00823-7 . PMC 8544647. PMID 33821000 .   
  34. ^ Kubitschke, Martín; Müller, Mónica; Wallhorn, Lutz; Pulín, Mauro; Mittag, Manuel; Pollok, Stefan; Ziebarth, Tim; Bremshey, Svenja; Gerdey, Jill; Claussen, Kristin Carolin; Renken, Kim; Groß, Juliana; Gneise, Pascal; Meyer, Niklas; Wiegert, J. Simon (6 de diciembre de 2022). "Sensores fluorescentes codificados genéticamente de próxima generación para serotonina" . Comunicaciones de la naturaleza . 13 (1): 7525. Código Bib : 2022NatCo..13.7525K . doi : 10.1038/s41467-022-35200-w . ISSN 2041-1723 . PMC 9726753 . PMID 36473867 . S2CID 247454046 .    
  35. ↑ Unger, Elizabeth K.; Keller, Jacob P.; Altermatt, Michael; Liang, Ruqiang; Matsui, Aya; et al. (diciembre de 2020). "Evolución dirigida de un sensor de serotonina selectivo y sensible mediante aprendizaje automático" . Cell . 183 ( 7): 1986–2002.e26. doi : 10.1016/j.cell.2020.11.040 . PMC 8025677. PMID 33333022 .   
  36. ↑ Feng J, Zhang C, Lischinsky JE, Jing M, Zhou J, Wang H, et al. (mayo de 2019). "Un sensor fluorescente codificado genéticamente para la detección rápida y específica in vivo de norepinefrina" . Neuron . 102 (4): 745–761.e8. doi : 10.1016/j.neuron.2019.02.037 . PMC 6533151. PMID 30922875 .   
  37. ↑ Dong A, He K, Dudok B, Farrell JS, Guan W, Liput DJ, et al. (noviembre de 2021). " Un sensor fluorescente para imágenes espaciotemporales resueltas de la dinámica de los endocannabinoides in vivo" . Nature Biotechnology . 40 (5): 787– 798. doi : 10.1038/s41587-021-01074-4 . PMC 9091059. PMID 34764491. S2CID 244039925 .    
  38. ↑ Duffet L, Kosar S, Panniello M, Viberti B, Bracey E, Zych AD, et al. (febrero de 2022). "Un sensor codificado genéticamente para la obtención de imágenes in vivo de neuropéptidos de orexina" . Nature Methods . 19 (2): 231– 241. doi : 10.1038/s41592-021-01390-2 . PMC 8831244. PMID 35145320 .   
  39. ^ Nasu, Yusuke; Murphy-Royal, Ciaran; Wen, Yurong; Haidey, Jordan N.; Molina, Rosana S.; Aggarwal, Abhi; Zhang, Shuce; Kamijou, Yuki; Paquet, Marie-Eve; Podgorski, Kaspar; Drobizhev, Mikhail; Bains, Jaideep S.; Lemieux, M. Joanne; Gordon, Grant R.; Campbell, Robert E. (6 de diciembre de 2021). "Un biosensor fluorescente codificado genéticamente para l-lactato extracelular" . Comunicaciones de la naturaleza . 12 (1): 7058. Código Bib : 2021NatCo..12.7058N . doi : 10.1038/s41467-021-27332-2 . ISSN 2041-1723 . PMC 8648760 . PMID 34873165 .   
  40. ↑ Greenwald EC, Mehta S, Zhang J (diciembre de 2018). " Los biosensores fluorescentes codificados genéticamente iluminan la regulación espaciotemporal de las redes de señalización" . Chemical Reviews . 118 (24): 11707– 11794. doi : 10.1021/acs.chemrev.8b00333 . PMC 7462118. PMID 30550275 .