Proteína L

La proteína L se aisló por primera vez de la superficie de la especie bacteriana Peptostreptococcus magnus y se descubrió que se unía a las inmunoglobulinas mediante la interacción de la cadena L , de donde se sugirió su nombre. ^{[ 2 ]} Consta de 719 residuos de aminoácidos. ^{[ 3 ]} El peso molecular de la proteína L purificada de las paredes celulares de Peptostreptococcus magnus se estimó por primera vez en 95 kD mediante SDS-PAGE en presencia del agente reductor 2-mercaptoetanol, mientras que el peso molecular se determinó en 76 kD mediante cromatografía de gel en presencia de 6 M de clorhidrato de guanidina . La proteína L no contiene bucles disulfuro intercatenarios, ni consta de subunidades unidas por disulfuro. Es una molécula ácida con un pI de 4,0. ^{[ 4 ]} A diferencia de la proteína A y la proteína G , que se unen a la región Fc de las inmunoglobulinas ( anticuerpos ), la proteína L se une a los anticuerpos mediante interacciones de la cadena ligera . Dado que ninguna parte de la cadena pesada participa en la interacción de unión, la proteína L se une a una gama más amplia de clases de anticuerpos que las proteínas A o G. La proteína L se une a representantes de todas las clases de anticuerpos, incluyendo IgG , IgM , IgA , IgE e IgD . Los fragmentos variables de cadena simple ( scFv ) y los fragmentos Fab también se unen a la proteína L.

A pesar de su amplio rango de unión, la proteína L no es una proteína de unión a anticuerpos universal . Su unión se restringe a aquellos anticuerpos que contienen cadenas ligeras kappa. En humanos y ratones, la mayoría de las moléculas de anticuerpos contienen cadenas ligeras kappa (κ) y el resto, cadenas ligeras lambda (λ). La proteína L solo es eficaz para unirse a ciertos subtipos de cadenas ligeras kappa. Por ejemplo, se une a los subtipos humanos VκI, VκIII y VκIV, pero no al subtipo VκII. La unión a las inmunoglobulinas de ratón se restringe a aquellas que poseen cadenas ligeras VκI. ^{[ 5 ]}

Dadas estas exigencias específicas para una unión eficaz, la principal aplicación de la proteína L inmovilizada es la purificación de anticuerpos monoclonales a partir de líquido ascítico o sobrenadante de cultivo celular que se sabe que poseen la cadena ligera kappa . La proteína L es extremadamente útil para la purificación de anticuerpos monoclonales que contienen VLκ a partir de sobrenadante de cultivo, ya que no se une a las inmunoglobulinas bovinas , que suelen estar presentes en el medio como suplemento sérico . Además, la proteína L no interfiere con el sitio de unión al antígeno del anticuerpo, lo que la hace útil para ensayos de inmunoprecipitación , incluso con IgM.

El gen de la proteína L contiene cinco componentes: una secuencia señal de 18 aminoácidos; una región N-terminal ("A") de 79 residuos; cinco repeticiones homólogas "B" de 72-76 aminoácidos cada una; una región C-terminal de dos repeticiones "C" adicionales (52 aminoácidos cada una); una región hidrofílica rica en prolina que atraviesa la pared celular ("W") después de las repeticiones C; y un anclaje de membrana hidrofóbico ("M"). Se descubrió que las repeticiones B (36 kD) son responsables de la interacción con las cadenas ligeras de Ig. ^[2]

Además de la proteína L, otras proteínas bacterianas que se unen a las inmunoglobulinas, como la proteína A , la proteína G y la proteína A/G, se utilizan comúnmente para purificar, inmovilizar o detectar inmunoglobulinas. Cada una de estas proteínas tiene un perfil de unión a anticuerpos diferente en cuanto a la porción del anticuerpo que reconoce y la especie y el tipo de anticuerpos a los que se une.