Tinción negativa

En microscopía , la tinción negativa es un método establecido, frecuentemente utilizado en microscopía diagnóstica, para contrastar una muestra delgada con un fluido ópticamente opaco . En esta técnica, se tiñe el fondo , dejando la muestra intacta y, por lo tanto, visible. Esto contrasta con la tinción positiva , en la que se tiñe la muestra.

Para la microscopía de campo claro , la tinción negativa se realiza típicamente con una tinta negra líquida como la nigrosina y la tinta china . La muestra, como un cultivo bacteriano húmedo extendido sobre un portaobjetos, se mezcla con la tinción negativa y se deja secar. Al observarse con el microscopio, las células bacterianas, y posiblemente sus esporas , aparecen claras sobre el fondo oscuro circundante. Se ha desarrollado un método alternativo que utiliza un rotulador común resistente al agua para aplicar la tinción negativa. ^{[ 1 ]}

En el caso de la microscopía electrónica de transmisión , la opacidad a los electrones está relacionada con el número atómico , es decir, el número de protones. Algunos colorantes negativos adecuados incluyen molibdato de amonio , acetato de uranilo , formiato de uranilo , ácido fosfotúngstico , tetróxido de osmio , ferricianuro de osmio ^{[ 2 ]} y auroglucotionato . Estos se han elegido porque dispersan fuertemente los electrones y también se adsorben bien a la materia biológica. Las estructuras que se pueden teñir negativamente son mucho más pequeñas que las estudiadas con el microscopio óptico. Aquí, el método se utiliza para ver virus , bacterias, flagelos bacterianos , estructuras de membranas biológicas y proteínas o agregados de proteínas, que tienen un bajo poder de dispersión de electrones. Algunos colorantes, como el tetróxido de osmio y el ferricianuro de osmio, son muy activos químicamente. Como oxidantes fuertes, entrecruzan los lípidos principalmente reaccionando con los enlaces carbono-carbono insaturados, y de este modo fijan las membranas biológicas en su lugar en las muestras de tejido y, simultáneamente, las tiñen. ^{[ 3 ] [ 4 ]}

La elección de la tinción negativa en microscopía electrónica puede ser crucial. Un estudio inicial sobre virus vegetales, utilizando inmersiones de hojas teñidas negativamente de una planta enferma, reveló únicamente virus esféricos con una tinción y únicamente virus con forma de bastón con otra. La conclusión verificada fue que esta planta sufría una infección mixta por dos virus distintos. La tinción negativa, tanto a nivel de microscopía óptica como electrónica, nunca debe realizarse con organismos infecciosos a menos que se sigan estrictas medidas de seguridad. La tinción negativa suele ser un método de preparación muy suave y, por lo tanto, no reduce la posibilidad de infección del operador.

La microscopía electrónica de transmisión con tinción negativa también se ha empleado con éxito para el estudio e identificación de agregados lipídicos acuosos como liposomas lamelares (le), micelas esféricas invertidas (M) y fases cilíndricas hexagonales HII invertidas (H) (véase la figura). ^{[ 5 ]}

• "Tinción negativa para principiantes" . Consultado el 6 de junio de 2009 .
• "Tinción negativa" . Consultado el 6 de junio de 2009 .{{cite web}}: CS1 maint: servicio de archivado obsoleto ( enlace )