agregometría de electrodos múltiples

El difosfato de adenosina (ADP) es un agonista plaquetario. Al añadirlo a sangre total diluida con solución salina en la cubeta de prueba, estimula los receptores de ADP en las plaquetas, activándolas. La activación plaquetaria provoca un cambio de forma y desgranulación, y el contenido liberado de los gránulos activa aún más las plaquetas. La activación también induce un cambio conformacional en el receptor de la glicoproteína IIb/IIIa (GPIIb/IIIa), lo que le confiere una alta afinidad por el fibrinógeno . La unión del fibrinógeno a los receptores GPIIb/IIIa da lugar a puentes plaquetarios y produce agregación plaquetaria. Los fármacos antiplaquetarios como el clopidogrel y el prasugrel inhiben irreversiblemente el receptor de ADP P2Y12 , lo que reduce la agregación plaquetaria inducida por ADP. Los fármacos que inhiben el receptor GPIIb/IIIa, como la eptifibatida , también pueden reducir o eliminar la respuesta plaquetaria inducida por ADP. ^{[ 11 ]}

En la prueba ASPI, se añade ácido araquidónico a la muestra de sangre diluida con solución salina. El ácido araquidónico se convierte en prostaglandina H2 (PGH2) por acción de la ciclooxigenasa-1 (COX1), y la PGH2 se convierte posteriormente en tromboxano A2 (TXA2) por acción de la tromboxano sintasa . El TXA2 aumenta la agregación plaquetaria, promueve la degranulación y estimula la activación plaquetaria. La inhibición de la COX1, como ocurre con el ácido acetilsalicílico , y la inhibición o ausencia del receptor GPIIb/IIIa, como se observa en la trombastenia de Glanzmann , reducirán la agregación plaquetaria en respuesta al ácido araquidónico. ^{[ 12 ]}

Se añade colágeno a la mezcla de muestra y solución salina, y este se une a los receptores de colágeno en las plaquetas. Esto provoca la liberación de ácido araquidónico, que se convierte en el potente activador plaquetario TXA2. La prueba COLtest es sensible a la inhibición de COX1 y GPIIb/IIIa y a la trombastenia de Glanzmann . ^{[ 13 ]}

La ristocetina forma complejos con el factor de von Willebrand (vWF) que se unen a los receptores de la glicoproteína Ib (GP1b) en las plaquetas, causando activación y agregación plaquetaria. La agregación reducida o ausente en respuesta a la ristocetina puede deberse a una falta o reducción de vWF, como se observa en la enfermedad de von Willebrand (vWD), o a la ausencia o reducción en el número de receptores GP1b, como en el síndrome de Bernard-Soulier (BSS). La prueba RISTOtest se puede realizar en dos concentraciones: RISTOhigh y RISTOlow. En RISTOhigh,  se aplica una concentración de ristocetina de 0,77 mg/mL. Esto normalmente induce una fuerte agregación plaquetaria, y la agregación baja o ausente puede deberse a las afecciones mencionadas anteriormente, vWD y BSS. ^{[ 14 ]} En RISTOlow, la concentración de ristocetina es de solo 0,2  mg/mL, y a un nivel que normalmente no induce una fuerte respuesta de agregación. Esta prueba puede detectar si el vWF muestra una tendencia más fuerte de lo normal a agregar plaquetas, lo que puede observarse en un subtipo de vWD llamado vWDIIb. ^{[ 15 ]}

El péptido activador del receptor de trombina-6 (TRAP-6) activa las plaquetas a través del receptor activado por proteasa del receptor de trombina -1 (PAR-1). La unión de TRAP-6 a PAR-1 provoca un cambio conformacional en los receptores GPIIb/IIIa de las plaquetas, lo que les confiere una alta afinidad por el fibrinógeno. El fibrinógeno se une entonces a los receptores, entrecruzando varias plaquetas y provocando su agregación. La agregación en la prueba TRAP puede estar reducida o ausente en la trombastenia de Glanzmann , donde los receptores GPIIb/IIIa son escasos o inexistentes, o si el paciente está tomando un antagonista de GPIIb/IIIa . La prueba TRAP tiene una sensibilidad mínima para la inhibición de los receptores COX1 y ADP. ^{[ 16 ]}

La adición de reactivo ASA ( ácido acetilsalicílico ) a una muestra de sangre reduce las respuestas de agregación en las pruebas ASPItest y COLtest. El ASA inhibe irreversiblemente la COX1 en las plaquetas, inhibiendo así la producción de TXA2. El reactivo ASA se utiliza como control de calidad en las pruebas de función plaquetaria con Multiplate, lo que permite evaluar las respuestas plaquetarias anormales en las pruebas ASPItest y COLtest. ^{[ 17 ]}

Este reactivo se utiliza como control de calidad en las pruebas de función plaquetaria Multiplate. El antagonista GPIIb/IIIa bloquea la unión del fibrinógeno a los receptores GPIIb/IIIa, impidiendo la formación de enlaces plaqueta-fibrinógeno y resultando en una agregación plaquetaria significativamente reducida en respuesta a todos los agonistas. El reactivo antagonista se utiliza junto con la prueba TRAP y permite evaluar un control positivo. ^{[ 18 ]}

La prostaglandina E1 (PGE1) es un inhibidor plaquetario que provoca un aumento del monofosfato de adenosina cíclico (AMPc) en las plaquetas al estimular la actividad de la adenilil ciclasa . El AMPc es una molécula de señalización intracelular , y el aumento de AMPc inhibe la movilización de calcio y la agregación plaquetaria inducida por la activación del receptor P2Y1 de ADP. La activación del receptor P2Y1 inicia la agregación plaquetaria en respuesta al ADP. El receptor P2Y1 es necesario para la activación plaquetaria inducida por ADP, pero no es suficiente para una agregación plaquetaria completa en respuesta al ADP. ^{[ 19 ]} El AMPc inhibe la agregación plaquetaria, y la disminución de las cantidades de AMPc en las plaquetas conduce a la agregación plaquetaria. ^{[ 20 ]} El reactivo PGE1 se utiliza junto con la prueba de ADP para dos propósitos: la evaluación de la alta sensibilidad (HS) del ADP y de los controles positivos de la prueba de ADP. Cuando se añade una pequeña cantidad de PGE1 (20 μL) a la prueba de ADP, se induce una inhibición moderada de la agregación en muestras normales, pero aumenta considerablemente la sensibilidad de las plaquetas a la inhibición por clopidogrel. Por ello, la prueba modificada se denomina de "alta sensibilidad". La adición de 50 μL de PGE1 a la prueba de ADP produce una fuerte inhibición de la agregación inducida por ADP y se utiliza para evaluar los controles positivos de dicha prueba. ^{[ 21 ]}