Hispanopedia WikiLa microinyección consiste en inyectar una sustancia líquida mediante una micropipeta de vidrio a nivel microscópico o casi macroscópico . El objetivo suele ser una célula viva, pero también puede incluir el espacio intercelular. La microinyección es un proceso mecánico sencillo que generalmente se realiza con un microscopio invertido con un aumento de aproximadamente 200x (aunque a veces se utiliza un microscopio estereoscópico de disección con un aumento de 40-50x o un microscopio compuesto vertical tradicional con un aumento similar al de un microscopio invertido).
Para procesos como la inyección celular o pronuclear , la célula diana se coloca bajo el microscopio y se utilizan dos micromanipuladores —uno que sostiene la pipeta y otro que sostiene una aguja microcapilar generalmente de entre 0,5 y 5 μm de diámetro (mayor si se inyectan células madre en un embrión)— para penetrar la membrana celular y/o la envoltura nuclear . [ 1 ] De esta manera, el proceso puede utilizarse para introducir un vector en una sola célula. La microinyección también puede utilizarse en la clonación de organismos, en el estudio de la biología celular y los virus, y para el tratamiento de la subfertilidad masculina mediante la inyección intracitoplasmática de espermatozoides (ICSI, / ˈ ɪ k s i / IK -ver ).
Historia
El uso de la microinyección como procedimiento biológico comenzó a principios del siglo XX, aunque incluso durante la década de 1970 no era de uso común. En la década de 1990, su uso aumentó significativamente y ahora se considera una técnica de laboratorio común, junto con la fusión de vesículas , la electroporación , la transfección química y la transducción viral , para introducir una pequeña cantidad de una sustancia en un objetivo pequeño. [ 2 ]
Tipos básicos
Existen dos tipos básicos de sistemas de microinyección. El primero se denomina sistema de flujo constante y el segundo, sistema de flujo pulsado . En un sistema de flujo constante, relativamente sencillo y económico, aunque algo tosco y obsoleto, se administra un flujo constante de muestra mediante una micropipeta , y la cantidad inyectada depende del tiempo que la aguja permanece dentro de la célula. Este sistema suele requerir una fuente de presión regulada, un soporte capilar y un micromanipulador de precisión. Un sistema de flujo pulsado, en cambio, permite un mayor control y consistencia en la cantidad de muestra inyectada: la configuración más común para la inyección intracitoplasmática de espermatozoides incluye un inyector Eppendorf "Femtojet" acoplado a un Eppendorf "InjectMan", aunque los procedimientos que involucran otros objetivos suelen utilizar equipos mucho menos costosos de capacidad similar. Debido a su mayor control sobre la colocación y el movimiento de la aguja, además de la mayor precisión en el volumen de sustancia administrada, la técnica de flujo pulsado suele causar menos daño a la célula receptora que la técnica de flujo constante. Sin embargo, la línea Eppendorf, al menos, tiene una interfaz de usuario compleja y sus componentes de sistema particulares suelen ser mucho más caros que los necesarios para crear un sistema de flujo constante o que otros sistemas de inyección de flujo pulsado. [ 3 ]
Inyección pronuclear
La inyección pronuclear es una técnica que se utiliza para crear organismos transgénicos mediante la inyección de material genético en el núcleo de un ovocito fecundado . Esta técnica se usa comúnmente para estudiar la función de los genes utilizando modelos animales de ratón.
Inyección pronuclear en ratones
La inyección pronuclear de espermatozoides de ratón es uno de los dos métodos más comunes para producir animales transgénicos (junto con la ingeniería genética de células madre embrionarias ). [ 4 ] Para que la inyección pronuclear sea exitosa, el material genético (típicamente ADN lineal ) debe inyectarse mientras el material genético del ovocito y el espermatozoide están separados (es decir, la fase pronuclear ). [ 5 ] Para obtener estos ovocitos, comúnmente se realiza la superovulación de ratones utilizando gonadotropinas . [ 6 ] Una vez que se ha producido la oclusión , se extraen los ovocitos del ratón y se les inyecta el material genético. El ovocito se implanta en el oviducto de un animal pseudopreñado . [ 5 ] Si bien la eficiencia varía, entre el 10 y el 40 % de los ratones nacidos de estos ovocitos implantados pueden contener el constructo inyectado . [ 6 ] Los ratones transgénicos pueden luego ser criados para crear líneas transgénicas.
Véase también
- Transgénesis
- ratón genéticamente modificado
- Biología: La unidad y la diversidad de la vida
- Nanoinyección
Referencias
- ↑ David B. Burr; Matthew R. Allen (11 de junio de 2013). Biología ósea básica y aplicada . Academic. pág. 157. ISBN 978-0-12-391459-0. Consultado el 15 de julio de 2013 .
- ↑ Juan Carlos Lacal; Rosario Perona; James Feramisco (11 de junio de 1999). Microinyección . Saltador. pag. 9.ISBN 978-3-7643-6019-1Consultado el 13 de julio de 2013 .
- ↑ Robert D. Goldman; David L. Spector (1 de enero de 2005). Imagenología de células vivas: Manual de laboratorio . CSHL. pág. 54. ISBN 978-0-87969-683-2. Consultado el 15 de julio de 2013 .
- ↑ Heinz Peter Nasheuer (2010). Estabilidad del genoma y enfermedades humanas . Springer. pág. 328. ISBN 978-90-481-3471-7. Consultado el 15 de julio de 2013 .
- 1 2 Mullin, Ann. "Proinyección nuclear" . Universidad de Tulane.
- 1 2 "Proinyección nuclear" . UC San Diego . Consultado el 6 de diciembre de 2019 .
- Biotecnología
- Administración de genes
