Prueba de indol

La prueba del indol es un análisis bioquímico que se realiza en especies bacterianas para determinar la capacidad del organismo de convertir el triptófano en indol . Esta conversión la lleva a cabo una cadena de diversas enzimas intracelulares , un sistema generalmente conocido como " triptofanasa ".

Bioquímica

El indol se genera mediante desaminación reductiva del triptófano a través del ácido indolpirúvico, una molécula intermedia. La triptofanasa cataliza la reacción de desaminación, durante la cual se elimina el ^grupoamino (-NH₂ ₎ de la molécula de triptófano. Los productos finales de la reacción son indol, ácido pirúvico , amonio (NH₄⁺ ₎ y energía. El fosfato de piridoxal es necesario como coenzima .

Realizar una prueba

Al igual que muchas pruebas bioquímicas realizadas en bacterias, los resultados de una prueba de indol se indican mediante un cambio de color tras la reacción con un reactivo añadido.

Antes de realizar la prueba, se debe cultivar un cultivo bacteriano puro en caldo de triptófano o peptona estéril durante 24 a 48 horas. Tras la incubación, se añaden cinco gotas del reactivo de Kovács ( alcohol isoamílico , para-dimetilaminobenzaldehído , ácido clorhídrico concentrado ) al caldo de cultivo.

Un resultado positivo se manifiesta por la presencia de un color rojo o rojo violeta en la capa superficial de alcohol del caldo. Un resultado negativo se presenta en color amarillo. También puede ocurrir un resultado variable, que se manifiesta en color naranja. Esto se debe a la presencia de escatol , también conocido como metilindol o indol metilado, otro posible producto de la degradación del triptófano.

El color rojo positivo se forma como resultado de una serie de reacciones. El para-dimetilaminobenzaldehído reacciona con el indol presente en el medio para formar un colorante rojo de rosindol. El alcohol isoamílico forma un complejo con el colorante de rosindol, lo que provoca su precipitación . El alcohol restante y el precipitado ascienden a la superficie del medio.

Cuando se realiza la prueba en bacterias no fermentadoras y anaerobias , se utiliza una variante de esta prueba que emplea el reactivo de Ehrlich (que utiliza alcohol etílico en lugar de alcohol isoamílico, desarrollado por Paul Ehrlich ).

Bacterias indol-positivas

Las bacterias que dan positivo en la prueba de escisión de indol del triptófano incluyen: Aeromonas hydrophila , Aeromonas punctata , Bacillus alvei , Edwardsiella sp., Escherichia coli , Flavobacterium sp., Haemophilus influenzae , Klebsiella oxytoca , Proteus sp. (no P. mirabilis ni P. penneri ), Plesiomonas shigelloides , Pasteurella multocida , Pasteurella pneumotropica , Vibrio sp. y Lactobacillus reuteri .

bacterias indol-negativas

Las bacterias que dan resultados negativos en la prueba del indol incluyen: Actinobacillus spp., Aeromonas salmonicida , Alcaligenes sp., la mayoría de Bacillus sp., Bordetella sp., Enterobacter sp., la mayoría de Haemophilus sp. , la mayoría de Klebsiella sp., Neisseria sp., Mannheimia haemolytica , Pasteurella ureae , Proteus mirabilis , P. penneri , Pseudomonas sp . , Salmonella sp ., Serratia sp., Yersinia sp. y Rhizobium sp.

La prueba del indol es una de las cuatro pruebas de la serie IMViC , que detecta la presencia de bacterias entéricas. Las otras tres pruebas incluyen: la prueba del rojo de metilo [M], la prueba de Voges-Proskauer [V] y la prueba del citrato [C]. ^{[ 1 ]}

Referencias

↑ Bachoon, Dave S., y Wendy A. Dustman. Manual de laboratorio de microbiología. Ed. Michael Stranz. Mason, OH: Cengage Learning, 2008. Ejercicio 15, "Flora normal del tracto intestinal". Impreso.

MacFaddin, Jean F. "Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias médicas." Williams & Wilkins, 1980, pp 173 – 183.
Ejemplo de reacciones típicas del indol
Angen, O; Mutters, R; Caugant, DA; Olsen, JE; Bisgaard, M (1999). "Relaciones taxonómicas del complejo [Pasteurella] haemolytica evaluadas mediante hibridaciones ADN-ADN y secuenciación de ARNr 16S con propuesta de Mannheimia haemolytica gen. nov., comb. nov., Mannheimia granulomatis comb. nov., Mannheimia glucosida sp. nov., Mannheimia ruminalis sp. nov. y Mannheimia varigena sp. nov." Int J Syst Bacteriol . 49 Pt 1: 67– 86. doi : 10.1099/00207713-49-1-67 . PMID 10028248 .

[1] Bachoon, Dave S., y Wendy A. Dustman. Manual de laboratorio de microbiología. Ed. Michael Stranz. Mason, OH: Cengage Learning, 2008. Ejercicio 15, "Flora normal del tracto intestinal". Impreso.

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