Hispanopedia WikiLa calceína , también conocida como fluorexón, complejo de fluoresceína , es un colorante fluorescente con longitudes de onda de excitación y emisión de 495 y 515 nm, respectivamente, y tiene la apariencia de cristales anaranjados. La calceína se autoextingue en concentraciones superiores a 70 mM y se utiliza comúnmente como un indicador de fuga de vesículas lipídicas. [1] [2] [3] También se ha utilizado tradicionalmente como un indicador complexométrico para la titulación de iones de calcio con EDTA y para la determinación fluorométrica de calcio.
Aplicaciones
El derivado acetometoxi no fluorescente de la calceína (calceína AM, AM = un cetoximetil ) se utiliza en biología , ya que puede transportarse a través de la membrana celular hasta las células vivas, lo que lo hace útil para probar la viabilidad celular y para el etiquetado a corto plazo de las células. Alternativamente, se pueden utilizar Fura-2 , Furaptra, Indo-1 y aequorina . Un grupo acetometoxi oscurece la parte de la molécula que quela Ca2 + , Mg2 + , Zn2 + y otros iones. Después del transporte a las células, las esterasas intracelulares eliminan el grupo acetometoxi, la molécula queda atrapada en el interior y emite una fuerte fluorescencia verde. Como las células muertas carecen de esterasas activas, solo las células vivas se etiquetan [4] y se cuentan mediante citometría de flujo .
Actualmente, la calceína rara vez se utiliza como indicador de Ca 2+ o Mg 2+ porque su fluorescencia es directamente sensible a estos iones solo a pH fuertemente alcalino y, por lo tanto, no es particularmente útil para medir Ca 2+ o Mg 2+ en células. La fluorescencia de la calceína se extingue fuertemente por Co 2+ , Ni 2+ y Cu 2+ y apreciablemente por Fe 3+ y Mn 2+ a pH fisiológico. Esta respuesta de extinción de la fluorescencia se puede aprovechar para detectar la apertura del poro de transición de permeabilidad mitocondrial (mPTP) y para medir los cambios de volumen celular. [5] La calceína se utiliza comúnmente para el rastreo celular y en estudios de endocitosis, migración celular y uniones en hendidura. [6]
El éster acetoximetil de calceína también se utiliza para detectar interacciones farmacológicas con proteínas de resistencia a múltiples fármacos (transportadores ABC, genes transportadores de casete de unión a ATP ) en células intactas, ya que es un excelente sustrato de la glicoproteína P del transportador de resistencia a múltiples fármacos 1 (MDR1) y de la proteína asociada a la resistencia a múltiples fármacos (MRP1). [7] El ensayo de calceína AM se puede utilizar como modelo para interacciones fármaco-fármaco, para la detección de sustratos transportadores y/o inhibidores; y también para determinar la resistencia a fármacos in vitro de las células, incluidas muestras de pacientes. [8]
La calceína también se utiliza para marcar peces recién nacidos [9] y para etiquetar huesos en animales vivos.
Referencias
- ^ Allen, TM; Cleland, LG (1980). "Fuga inducida por suero del contenido de los liposomas". Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Biomembranas . 597 (2): 418–426. doi :10.1016/0005-2736(80)90118-2. PMID 7370258.
- ^ Fuga de liposomas que contienen gangliósidos inducida por el virus Sendai Yung Shyeng Tsao y Leaf Huang Biochemistry 1985 24 (5), 1092-1098
- ^ Patel, H.; Tscheka, C.; Heerklotz, H. (2009). "Caracterización de la fuga de vesículas mediante mediciones del tiempo de vida de la fluorescencia". Soft Matter . 5 (15): 2849–2851. Código Bibliográfico :2009SMat....5.2849P. doi :10.1039/B908524F.
- ^ "Cómo funcionan los microscopios ópticos". HowStuffWorks. 25 de mayo de 2001.
- ^ Hamann, JF; Kiilgard; Litman, T.; Alvarez-Leefmans, J.; Zeuthen, T. (2002). "Medición de cambios en el volumen celular mediante autoextinción de la fluorescencia". J. Fluorescence . 12 (2): 139–145. doi :10.1023/a:1016832027325. S2CID 20539474.
- ^ "Indicadores fluorescentes para Zn2+ y otros iones metálicos: Sección 19.7". Sondas moleculares: el manual. invitrogen.
- ^ Glavinas H, Krajcsi P, Cserepes J, Sarkadi B (enero de 2004). "El papel de los transportadores ABC en la resistencia a los fármacos, el metabolismo y la toxicidad". Curr Drug Deliv . 1 (1): 27–42. doi :10.2174/1567201043480036. PMID 16305368. Archivado desde el original el 19 de julio de 2012.
{{cite journal}}: CS1 maint: URL no apta ( enlace ) - ^ Karászi E, Jakab K, Homolya L, et al. (febrero de 2001). "El ensayo de calceína para la resistencia a múltiples fármacos predice de manera fiable la respuesta a la terapia y la tasa de supervivencia en la leucemia mieloide aguda". Br. J. Haematol . 112 (2): 308–14. doi : 10.1046/j.1365-2141.2001.02554.x . PMID 11167823.
- ^ "Marcado de alevines con calceína". Game & Wildlife Conservation Trust. Archivado desde el original el 25 de septiembre de 2006.
