URA3

URA3 es un gen ubicado en el cromosoma V de Saccharomyces cerevisiae (levadura). Su nombre sistemático es YEL021W . URA3 se utiliza frecuentemente en la investigación de levaduras como un "gen marcador", es decir, un gen para etiquetar cromosomas o plásmidos . URA3 codifica la orotidina 5'-fosfato descarboxilasa (ODCase) , una enzima que cataliza una reacción en la síntesis de ribonucleótidos de pirimidina (un componente del ARN ). ^{[ 1 ]}

La pérdida de la actividad de la ODCase provoca la falta de crecimiento celular a menos que se añada uracilo o uridina al medio de cultivo. La presencia del gen URA3 en la levadura restaura la actividad de la ODCase, facilitando el crecimiento en medios sin suplementar con uracilo o uridina, lo que permite la selección de levaduras portadoras del gen. Por el contrario, si se añade 5-FOA (ácido 5-fluoroorótico) al medio, la ODCase activa convertirá el 5-FOA en el compuesto tóxico (un inhibidor suicida ) 5-fluorouracilo , causando la muerte celular, lo que permite la selección en contra de las levaduras portadoras del gen.

Dado que URA3 permite tanto la selección positiva como la negativa, se ha desarrollado como marcador genético para transformaciones de ADN y otras técnicas genéticas en bacterias y muchas especies de hongos. Es uno de los marcadores genéticos más importantes en la modificación genética de levaduras . Si bien URA3 es un potente marcador de selección, presenta un alto nivel de ruido de fondo. Esto se debe a que las células que adquieren mutaciones en URA3 también pueden crecer en presencia de 5-FOA. Las colonias deben verificarse mediante un segundo ensayo, como la PCR, para confirmar que se ha creado la cepa deseada.

• "Gen URA3" . Base de datos de S. cerevisiae . 2018.