Chapado de réplica

La replicación en placa es una técnica microbiológica en la que una o más placas de Petri secundarias que contienen diferentes medios de cultivo selectivos sólidos (a base de agar ) (sin nutrientes o con inhibidores químicos del crecimiento, como antibióticos ) se inoculan con las mismas colonias de microorganismos de una placa primaria (o placa maestra), reproduciendo así el patrón espacial original de las colonias. La técnica consiste en presionar un disco cubierto de terciopelo y, a continuación, imprimir en las placas secundarias las células de las colonias extraídas de la placa original mediante dicho material. Generalmente, se replican grandes cantidades de colonias (entre 30 y 300 aproximadamente) debido a la dificultad de sembrarlas individualmente en una placa separada.

El objetivo de la replicación en placa es comparar la placa maestra con las placas secundarias, generalmente para detectar un fenotipo específico . Por ejemplo, si una colonia presente en la placa primaria (o placa maestra) no aparece en una placa secundaria, esto indica que la colonia era sensible a una sustancia presente en esa placa secundaria en particular. Algunos fenotipos comunes que se pueden detectar son la auxotrofia y la resistencia a los antibióticos .

La replicación en placa es especialmente útil para la " selección negativa ". Sin embargo, es más correcto referirse a la "cribación negativa" en lugar de usar el término "selección". Por ejemplo, si se quisieran seleccionar colonias sensibles a la ampicilina , la placa primaria podría replicarse en una placa secundaria de agar Amp ⁺ . Las colonias sensibles en la placa secundaria morirían, pero aún podrían identificarse a partir de la placa primaria, ya que ambas presentan los mismos patrones espaciales de colonias resistentes a la ampicilina. Posteriormente, las colonias sensibles podrían aislarse de la placa primaria. Con frecuencia, la última placa será no selectiva. En la figura, se replicará una placa no selectiva después de la placa Amp+ para confirmar que la ausencia de crecimiento en la placa selectiva se debe a la selección en sí y no a un problema con la transferencia de células. Si se observa crecimiento en la tercera placa (no selectiva) pero no en la segunda, el agente selectivo es el responsable de la falta de crecimiento. Si la placa no selectiva no muestra crecimiento, no se puede determinar si se transfirieron células viables, ni se pueden extraer conclusiones sobre la presencia o ausencia de crecimiento en medios selectivos. Esto resulta especialmente útil si existen dudas sobre la edad o la viabilidad de las células en la placa original.

Al aumentar la variedad de placas secundarias con diferentes medios de cultivo selectivos , es posible examinar rápidamente un gran número de colonias aisladas individuales para detectar tantos fenotipos como placas secundarias haya.

El desarrollo de la replicación en placa requirió dos pasos. El primer paso fue definir el problema: un método para duplicar colonias de manera identificable. El segundo paso fue idear un medio para implementar de manera confiable el primer paso. La replicación en placa fue descrita por primera vez por Esther Lederberg y Joshua Lederberg en 1952. Una de las placas de agar nutritivo tendrá resistencia a los antibióticos. ^{[ 1 ]} Lederberg buscó usar una tela que pudiera esterilizarse y que tuviera una pila de tela vertical , similar a un análogo 2D de un "cepillo de alambre" que se había usado clásicamente para transferir colonias. El papel no era satisfactorio ya que "su capilaridad lateral y su compresión de las colonias distorsionaban y rompían el patrón de crecimiento original", y el terciopelo de nailon era demasiado caro y sus fibras más rígidas causaban problemas, lo que llevó a la elección y eventual estandarización en terciopelo de algodón. ^{[ 2 ]} Si bien se demostró por primera vez con bacterias , la replicación en placa basada en terciopelo también se ha convertido en una técnica estándar en la microbiología de eucariotas , como la levadura . ^{[ 3 ]}