Origen de la transferencia

Un origen de transferencia ( oriT ) es una secuencia corta de entre 40 y 500 pares de bases ^{[ 1 ] [ 2 ]} que es necesaria para la transferencia de ADN de una bacteria donante gramnegativa a una receptora durante la conjugación bacteriana . ^{[ 3 ] [ 4 ] [ 5 ]} La transferencia de ADN es un componente crítico para la resistencia antimicrobiana dentro de las células bacterianas ^{[ 6 ]} y la estructura y el mecanismo del oriT dentro del ADN plasmídico son complementarios a su función en la conjugación bacteriana. El primer oriT que se identificó y clonó fue en el plásmido conjugativo RK2 (IncP), lo cual fue realizado por Guiney y Helinski en 1979. ^{[ 7 ]}

Las regiones oriT son fundamentales para el proceso de transferencia de ADN del donante al receptor y contienen varias regiones importantes que facilitan este proceso:

1. sitio nic : donde se corta el ADN plasmídico desenrollado; generalmente es un sitio específico. ^{[ 4 ] [ 8 ] [ 9 ]}
2. Una secuencia repetida invertida : señala el final de la replicación del ADN donante y es responsable de la frecuencia de transferencia, la movilización del plásmido y la formación de la estructura secundaria del ADN. ^{[ 3 ] [ 8 ] [ 10 ]}
3. Región rica en AT: importante para la apertura de la cadena de ADN y se encuentra adyacente a las secuencias repetidas invertidas. ^{[ 1 ] [ 3 ] [ 5 ] [ 8 ] [ 11 ] [ 12 ]}

El oriT es una región no codificante del ADN bacteriano. ^{[ 13 ]} Debido a su importante papel en el inicio de la conjugación bacteriana, el oriT es tanto un sustrato enzimático como un sitio de reconocimiento para las proteínas relaxasas . ^{[ 1 ] [ 13 ] [ 14 ]} Los relaxosomas tienen factores auxiliares específicos del oriT que les ayudan a identificar y unirse al oriT . ^{[ 1 ]} Corriente arriba del sitio nic del oriT hay una secuencia de terminación. ^{[ 5 ]}

Los oriT son principalmente cis - activos, lo que permite una transferencia de ADN más eficiente. ^{[ 5 ] [ 12 ] [ 15 ]}

Al inicio de la conjugación bacteriana, una célula donante elabora un pilus y envía una señal a una célula receptora cercana para que se acerque. Esta identificación de una célula receptora adecuada inicia el proceso de formación de la pareja de apareamiento. ^{[ 1 ] [ 16 ]} Este proceso de acercamiento de las dos células recluta el sistema de secreción de tipo IV , un complejo proteico que forma el canal de transferencia entre la donante y la receptora, iniciando la formación del complejo de relajación conocido como relaxosoma en el oriT . ^{[ 13 ]}

La secuencia oriT de un plásmido sirve como punto de reconocimiento y sustrato para las enzimas del relaxosoma, ^{[ 13 ]} por lo tanto, el primer paso de la conjugación bacteriana ocurre en el sitio nicn de la región oriT del plásmido. ^{[ 4 ] [ 14 ]} Las enzimas relaxasa , también conocidas como transferasas de cadena de ADN, parte del complejo relaxosoma , catalizan una escisión del enlace fosfodiéster específica de cadena y sitio en el sitio nicn y son específicas para cada plásmido. ^{[ 17 ]} Esta reacción es una transesterificación , que produce un ADN de doble cadena con una muesca, cuyo extremo 5' está unido a un residuo de tirosina en la relaxasa. ^{[ 4 ] [ 5 ] [ 14 ] [ 17 ]} La relaxasa luego se mueve hacia el extremo 3' de la cadena para desenrollar el ADN en el plásmido. ^{[ 17 ]}

La otra hebra del plásmido, la hebra que no fue cortada por la relaxasa, es un molde para la síntesis posterior por la ADN polimerasa . ^{[ 17 ]}

Una vez que la relaxasa alcanza nuevamente la sección corriente arriba del oriT donde hay una repetición invertida , el proceso termina al reunir los extremos del plásmido y liberar un plásmido monocatenario en el receptor. ^{[ 5 ] [ 15 ] [ 18 ]}

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