La ingeniería de tejido muscular es una subdisciplina de la ingeniería de tejidos , que estudia el uso combinado de células y andamios para diseñar implantes de tejido terapéuticos. En el ámbito clínico, la ingeniería de tejido muscular implica el cultivo de células del propio cuerpo del paciente o de un donante, el desarrollo de tejido muscular con o sin el uso de andamios y, posteriormente, la inserción de tejido muscular funcional en el cuerpo del paciente. Idealmente, esta implantación da como resultado la regeneración completa de la función y la estética en el cuerpo del paciente. Fuera del ámbito clínico, la ingeniería de tejido muscular se utiliza en la detección de fármacos, actuadores musculares mecánicos híbridos, dispositivos robóticos y el desarrollo de carne cultivada en laboratorio como nueva fuente de alimento. [ 1 ]
Las innovaciones en el campo de la ingeniería de tejidos musculares buscan reparar y reemplazar el tejido muscular defectuoso, restaurando así su función normal. El proceso comienza con la extracción y el aislamiento de células musculares de un sitio donante, para luego cultivarlas en un medio de cultivo. Las células cultivadas forman láminas celulares y, finalmente, haces musculares que se implantan en el paciente.
Descripción general
El músculo es un órgano alineado naturalmente, con fibras musculares individuales empaquetadas en unidades más grandes llamadas fascículos musculares . [ 2 ] La alineación uniaxial de las fibras musculares les permite contraerse simultáneamente en la misma dirección y propagar adecuadamente la fuerza sobre los huesos a través de los tendones . Aproximadamente el 45% del cuerpo humano está compuesto de tejido muscular, y este tejido se puede clasificar en tres grupos diferentes: músculo esquelético , músculo cardíaco y músculo liso . El músculo desempeña un papel en la estructura, la estabilidad y el movimiento en los cuerpos de los mamíferos. La unidad básica de un músculo es una fibra muscular, que está formada por miofilamentos de actina y miosina. Esta fibra muscular contiene sarcómeros que generan la fuerza necesaria para la contracción.
Un objetivo principal de la ingeniería de tejidos musculares es crear estructuras con la funcionalidad del músculo nativo y la capacidad de contraerse. Para ello, la alineación de la estructura de tejido diseñado es de suma importancia. Se ha demostrado que las células cultivadas en sustratos con señales de alineación forman fibras musculares más robustas. [ 3 ] Otros criterios de diseño considerados en la ingeniería de tejidos musculares incluyen la porosidad, la rigidez, la biocompatibilidad y el tiempo de degradación del andamio. Idealmente, la rigidez del sustrato debería estar en el rango miogénico , que se ha demostrado que es de 10 a 15 kPa. [ 4 ]
El propósito de la ingeniería de tejido muscular es reconstruir tejido muscular funcional que se ha perdido por lesión traumática, ablación de tumores o daño funcional causado por miopatías. Hasta ahora, el único método utilizado para restaurar la función y la estética del tejido muscular era la transferencia de tejido libre. Sin embargo, por lo general no se restaura la función completa, lo que resulta en morbilidad del sitio donante y deficiencia de volumen. El éxito de la ingeniería de tejidos en lo que respecta a la regeneración de piel, cartílago y hueso indica que se encontrará el mismo éxito en la ingeniería de tejido muscular. [ 5 ] Las primeras innovaciones en el campo produjeron el cultivo celular in vitro y la regeneración de tejido muscular que se implantaría en el cuerpo, pero los avances en los últimos años han demostrado que puede haber potencial para la ingeniería de tejido muscular in vivo utilizando andamios .
Etimología
El término ingeniería de tejido muscular, si bien es un subconjunto de la disciplina mucho más amplia de la ingeniería de tejidos, fue acuñado por primera vez en 1988 cuando Herman Vandenburgh, un cirujano, cultivó miotubos aviares en placas de cultivo recubiertas de colágeno. [ 6 ] Esto dio inicio a una nueva era de ingeniería de tejidos in vitro. El ideal fue adoptado oficialmente en 1988 en la publicación de Vandenburgh titulada Mantenimiento de miotubos esqueléticos aviares altamente contráctiles cultivados en gel de colágeno . [ 7 ] En 1989, el mismo grupo determinó que la estimulación mecánica de mioblastos in vitro facilita el crecimiento del músculo esquelético diseñado . [ 8 ]
Historia
Siglo XIX
Ya en 1835, cuando se describió por primera vez la miogénesis embrionaria, se empezó a desarrollar una comprensión rudimentaria del tejido muscular . En la década de 1860, se demostró que el músculo es capaz de regenerarse y se llevó a cabo una regeneración experimental para comprender mejor el método específico mediante el cual esto ocurría in vivo. Tras este descubrimiento, se describieron por primera vez la generación y la degeneración muscular en el ser humano. En consecuencia, los investigadores evaluaron varios aspectos de la regeneración muscular in vivo, incluyendo "la regeneración continua o discontinua según el tipo de tejido", para aumentar la comprensión funcional del fenómeno. [ 9 ] Sin embargo, no fue hasta la década de 1960 que los investigadores determinaron qué componentes eran necesarios para la regeneración muscular. [ 9 ]
Siglo XX
En 1957, se determinó mediante el análisis del ADN que los mioblastos proliferan, pero los mionúcleos no. Tras este descubrimiento, Mauro y Katz [ 10 ] identificaron experimentalmente la célula satélite como una célula madre que se encuentra en la superficie de la miofibra y tiene la capacidad de diferenciarse en células musculares. Las células satélite proporcionan mioblastos para el crecimiento, la diferenciación y la reparación del tejido muscular. La ingeniería de tejidos musculares se consolidó oficialmente como disciplina en 1988, cuando Herman Vandenburgh cultivó miotubos aviares en placas de cultivo recubiertas de colágeno. Posteriormente, en 1989, se descubrió que la estimulación mecánica de los mioblastos in vitro facilita el crecimiento del músculo esquelético artificial. La mayoría de las innovaciones modernas en el campo de la ingeniería de tejidos musculares se encuentran en el siglo XXI.
siglo XXI
Entre 2000 y 2010, se evaluaron los efectos de la pérdida muscular volumétrica (PMV) en relación con la ingeniería de tejidos musculares. La PMV puede ser causada por diversas lesiones o enfermedades, como traumatismos generales , daños postoperatorios, ablación por cáncer , defectos congénitos y miopatía degenerativa . Si bien el músculo contiene una población de células madre llamadas células satélite , capaces de regenerar pequeñas lesiones musculares, el daño muscular en la PMV es tan extenso que supera la capacidad regenerativa natural del músculo. Actualmente, la PMV se trata mediante un colgajo o injerto muscular autólogo, pero este procedimiento presenta varios problemas. La morbilidad del sitio donante, la escasez de tejido donante y la vascularización inadecuada limitan la capacidad de los médicos para tratar adecuadamente la PMV. [ 11 ] El campo de la ingeniería de tejidos musculares busca abordar este problema mediante el diseño de una estructura muscular funcional que pueda utilizarse para tratar el músculo dañado, en lugar de extraer un colgajo muscular autólogo de otra parte del cuerpo del paciente.
Las investigaciones realizadas entre 2000 y 2010 permitieron concluir que el análisis funcional de un tejido muscular bioingenierizado es importante para demostrar su potencial de regeneración muscular. Generalmente, se utilizan diversos ensayos para evaluar un tejido muscular bioingenierizado, como la inmunohistoquímica , la RT-PCR , la estimulación eléctrica y la medición del voltaje pico a pico resultante , la microscopía electrónica de barrido y la respuesta in vivo.
Los avances más recientes en este campo incluyen la carne cultivada, los sistemas biorrobóticos y los implantes biohíbridos en medicina regenerativa o modelado de enfermedades. [ 12 ]
Ejemplos
La mayoría de los avances actuales en ingeniería de tejidos musculares se centran en el músculo esquelético, por lo que la mayoría de estos ejemplos tratarán sobre ingeniería y regeneración muscular. En esta sección también revisaremos algunos ejemplos de ingeniería de tejido muscular liso y de músculo cardíaco.
Ingeniería de tejidos musculares esqueléticos (SMTE)
- Miotubos aviares: miotubos esqueléticos altamente contráctiles cultivados y diferenciados in vitro en placas de cultivo recubiertas de colágeno [ 13 ].
- Carne cultivada (CM): carne cultivada, basada en células, cultivada en laboratorio, in vitro, carne limpia obtenida a través de la agricultura celular [ 14 ].
- Músculo bioartificial humano (BAM): se forma mediante un procedimiento de ingeniería de tejidos in vitro de siete días en el que los mioblastos humanos se fusionan y diferencian en miofibras alineadas en una matriz extracelular ; [ 15 ] estos constructos se utilizan para la inyección intramuscular de fármacos para reemplazar los modelos de inyección preclínicos o no clínicos y complementar los estudios en animales.
- Transferencia de mioblastos en el tratamiento de la distrofia muscular de Duchenne (DMD): [ 16 ] una técnica in vivo para reemplazar la distrofina , una proteína del músculo esquelético que es deficiente en pacientes con DMD; los mioblastos se fusionan con las fibras musculares y aportan sus núcleos que luego reemplazan los productos genéticos deficientes en los núcleos del huésped.
- Trasplante autólogo de células madre hematopoyéticas (TCMH) como método para tratar la esclerosis múltiple (EM): [ 17 ] una técnica in vivo para tratar la EM en la que el sistema inmunitario se destruye y se reconstituye con células madre hematopoyéticas; se ha demostrado que reduce los efectos de la EM durante 4-5 años en el 70-80% de los pacientes.
- Reparación de la pérdida muscular volumétrica mediante células madre derivadas del músculo (MDSC): [ 18 ] una técnica in situ para la reparación de la pérdida muscular en pacientes que han sufrido traumatismos o lesiones de combate; las MDSC, incorporadas en un gel de fibrina in situ, fueron capaces de formar nuevas miofibras que se injertaron en un defecto muscular creado mediante una resección en cuña de espesor parcial en el músculo tibial anterior de ratones de laboratorio.
- Desarrollo de organoides de músculo esquelético para modelar trastornos neuromusculares y distrofias musculares; [ 19 ] una técnica in vitro en la que las células madre pluripotentes humanas (hPSC) se diferencian en organoides de músculo esquelético humano 3D funcionales (hSkMO); las hPSC se guiaron hacia el linaje mesodérmico paraxial que luego da lugar a células progenitoras miogénicas y mioblastos en placas de cultivo sin andamiaje; los organoides eran redondos, de tamaño uniforme y exhibían una morfología homogénea al desarrollarse completamente, y se demostró que modelaban con éxito el desarrollo y la regeneración muscular.
- Músculo tibial anterior (TA) bioimpreso en ratas: [ 20 ] una técnica in vitro en la que se fabricó tejido muscular esquelético bioingenierizado compuesto de células progenitoras musculares primarias humanas (hMPCs); tras la implantación, el material bioimpreso alcanzó una recuperación funcional del 82 % en modelos de roedores del músculo TA.
Ingeniería de tejidos musculares lisos
- Inyecciones de MDSC autólogas para tratar la incontinencia urinaria : [ 21 ] una técnica de inyección in vivo para la incontinencia de esfuerzo pura en mujeres, en la que las células musculares defectuosas se reemplazaron con células madre que se diferenciarían para convertirse en células musculares lisas funcionales en el esfínter urinario.
- Regeneración del músculo liso vascular mediante células madre pluripotentes inducidas (iPSC); [ 22 ] una técnica in vitro en la que las iPSC se diferenciaron en células musculares lisas proliferativas utilizando un andamio nanofibroso .
- Formación de estructuras celulares tridimensionales (3D) enrolladas que contienen células similares al músculo liso diferenciadas a partir de células adiposas desdiferenciadas (DFAT): [ 23 ] una técnica in vitro para controlar la organización 3D de las células del músculo liso en la que las células DFAT se suspenden en una mezcla de proteínas extracelulares con rigidez optimizada para que se diferencien en células similares al músculo liso con una orientación 3D específica; una estructura de tejido muscular diseñada para un precursor de células del músculo liso
Ingeniería de tejidos musculares cardíacos
- Administración intracoronaria de células progenitoras derivadas de la médula ósea: [ 24 ] una técnica in vivo en la que se administran células progenitoras derivadas de la médula ósea en una arteria infartada para que se diferencien en células cardíacas funcionales y recuperen la función contráctil después de un infarto agudo de miocardio con elevación del segmento ST, previniendo así la remodelación adversa del ventrículo izquierdo.
- Organoides cardíacos humanos [ 25 ] : una técnica in vitro, sin andamiaje, para producir un organoide cardíaco funcional; los esferoides cardíacos hechos de una población celular mixta derivada de cardiomiocitos derivados de células madre pluripotentes inducidas humanas (hiPSC-CM) cultivados en placas de pocillos recubiertas de gelatina, sin andamiaje, dieron como resultado la generación de un organoide cardíaco funcional.
Métodos
Los métodos de ingeniería de tejido muscular se clasifican sistemáticamente en la literatura en tres grupos: ingeniería de tejido muscular in situ, in vivo e in vitro. Analizaremos cada una de estas categorías y detallaremos las prácticas específicas utilizadas en cada una.
In situ
« In situ » es una locución latina cuya traducción literal es «en el sitio». Es un término que se utiliza en inglés desde mediados del siglo XVIII para describir algo que se encuentra en su lugar o posición original. En el contexto de la ingeniería de tejido muscular, la ingeniería de tejido in situ implica la introducción e implantación de un andamio acelular en el sitio de la lesión o del tejido degenerado. El objetivo de la ingeniería de tejido muscular in situ es fomentar el reclutamiento de células del huésped, la formación de un andamio natural y la proliferación y diferenciación de las células del huésped. La idea principal en la que se basa la ingeniería de tejido muscular in situ son las propiedades regenerativas y de autorreparación del cuerpo de los mamíferos. [ 26 ] El método principal para la ingeniería de tejido muscular in situ se describe en la siguiente sección:
Como se describe en Biomateriales para la regeneración tisular in situ: una revisión (Abdulghani y Mitchell, 2019), [ 27 ] la ingeniería de tejido muscular in situ requiere biomateriales muy específicos que tengan la capacidad de reclutar células madre o células progenitoras al sitio del defecto muscular, permitiendo así la regeneración del tejido sin la implantación de células semilla. La clave para un andamio exitoso son las propiedades apropiadas (es decir, biocompatibilidad, resistencia mecánica, elasticidad, biodegradabilidad) y la forma y volumen correctos para el defecto muscular específico en el que se implantan. Este andamio debe imitar eficazmente la respuesta celular del tejido huésped, y Mann et al. han descubierto que los hidrogeles a base de polietilenglicol son muy exitosos como andamios de biomateriales in situ porque están modificados químicamente para ser degradados por enzimas biológicas, lo que fomenta la migración y proliferación celular. [ 28 ] Más allá de los hidrogeles a base de polietilenglicol, los biomateriales sintéticos como el PLA y el PCL son andamios in situ eficaces, ya que pueden personalizarse completamente para cada paciente. Las propiedades de rigidez, degradación y porosidad de estos materiales se adaptan a la topología, el volumen y el tipo de células del tejido degenerado para proporcionar el entorno óptimo para la migración y proliferación de las células del huésped.
La ingeniería in situ promueve la regeneración natural del tejido dañado al imitar eficazmente la respuesta de cicatrización propia del cuerpo de los mamíferos. El uso de biomateriales biológicos y sintéticos como andamios favorece la migración y proliferación de las células del huésped directamente en la zona afectada, reduciendo así el tiempo necesario para la regeneración del tejido muscular. Además, gracias a las propiedades biodegradables de cada andamio, la ingeniería in situ evita el riesgo de rechazo del implante por parte del sistema inmunitario.
In Vivo
« In vivo » es una locución latina cuya traducción literal es «en un ser vivo». Este término se utiliza en inglés para describir un proceso que ocurre dentro de un organismo vivo. En el ámbito de la ingeniería de tejidos musculares, este término se aplica a la siembra de células en un andamio de biomaterial inmediatamente antes de la implantación. El objetivo de la ingeniería de tejidos musculares in vivo es crear un andamio con células sembradas que, una vez implantado en el sitio de la herida, conserve la eficacia celular. Los métodos in vivo proporcionan un mayor control sobre el fenotipo celular, las propiedades mecánicas y la funcionalidad del constructo tisular. [ 26 ]
Como se describe en Ingeniería de tejido muscular esquelético: estrategias basadas en biomateriales para el tratamiento de la pérdida muscular volumétrica (Carnes y Pins, 2020), [ 26 ] la ingeniería de tejido muscular in vivo se basa en el concepto de ingeniería in situ al no solo implantar un andamio de biomaterial con propiedades mecánicas y químicas específicas, sino también sembrar el andamio con el tipo celular específico necesario para la regeneración del tejido. Reid et al. [ 29 ] describen los andamios comunes utilizados en el proceso de ingeniería de tejido muscular in vivo. Estos andamios incluyen hidrogeles infundidos con ácido hialurónico (HA), gelatina, fibroína de seda y quitosano, ya que estos materiales promueven la migración y proliferación de células musculares. Por ejemplo, un material biodegradable y renovable derivado de la quitina conocido como quitosano, tiene propiedades mecánicas únicas que apoyan la diferenciación y retención de células de músculo liso en el sitio de regeneración del tejido. Cuando este andamio se funcionaliza aún más con arginina-glicina-ácido aspártico (RGD), proporciona un mejor entorno de crecimiento para las células del músculo liso. Otro andamio comúnmente utilizado es el tejido de matriz extracelular (MEC) descelularizada, ya que es totalmente biocompatible, biodegradable y contiene todos los sitios de unión de proteínas necesarios para la recuperación funcional completa y la integración del tejido muscular. Una vez sembrado con células, este material se convierte en un entorno óptimo para la proliferación celular y la integración con el tejido existente, ya que imita eficazmente el entorno en el que el tejido se regenera naturalmente en el cuerpo de los mamíferos.
La técnica de ingeniería de tejido muscular in vivo proporciona al proceso de cicatrización de heridas una ventaja inicial, ya que el cuerpo ya no necesita reclutar células del huésped para comenzar la regeneración. Este enfoque también evita la necesidad de manipulación celular previa a la implantación, asegurando así que mantengan todas sus propiedades mecánicas y funcionales. [ 30 ]
In vitro
« In vitro » es una locución latina cuya traducción literal es «dentro del vidrio». Este término se utiliza en inglés para describir un proceso que ocurre fuera de un organismo vivo. En el contexto de la ingeniería de tejidos musculares, el término «in vitro» se refiere a la siembra de células en un andamio de biomaterial con factores de crecimiento y nutrientes, y al posterior cultivo de estas estructuras hasta que se desarrolla una estructura funcional, como las miofibras. Estas estructuras desarrolladas se implantan en la zona de la herida con la expectativa de que continúen proliferando e integrándose en el tejido muscular del huésped. El objetivo de la ingeniería de tejidos musculares in vitro es aumentar la funcionalidad del tejido antes de su implantación en el cuerpo, mejorando así sus propiedades mecánicas y su potencial de desarrollo en el organismo huésped.
Abdulghani y Mitchell [ 27 ] describen la ingeniería de tejido muscular in vitro como un concepto que utiliza las mismas estrategias básicas que la ingeniería de tejido in vivo. La diferencia entre ambos métodos radica en el desarrollo de un injerto muscular de ingeniería tisular (TEMG) completamente funcional, que se produce en la técnica in vitro. La ingeniería de tejido muscular in vitro incluye la siembra de células en un andamio de biomaterial, pero va un paso más allá al añadir factores de crecimiento y señales bioquímicas y biofísicas para promover el crecimiento, la proliferación, la diferenciación y, finalmente, la regeneración celular en una estructura de tejido muscular funcional. Por lo general, los andamios in vitro contienen características superficiales específicas que guían la dirección de la proliferación celular. Suelen ser fibrosos con poros alineados, ya que estas características favorecen la adhesión celular durante la regeneración. Además de los tipos de andamios utilizados en esta técnica, un aspecto fundamental es la estimulación eléctrica y mecánica, que imita el entorno de regeneración natural y promueve la expansión de las vías de comunicación intracelular. Antes de introducir los TEMG en el defecto de la herida, deben vascularizarse para promover una correcta integración con el tejido huésped. Para lograr la vascularización, los investigadores suelen sembrar un andamio con múltiples tipos de células para desarrollar tanto tejido muscular como vías vasculares. Este proceso previene el rechazo del TEMG tras la implantación, ya que este puede prosperar eficazmente en el entorno del tejido huésped. Sin embargo, siempre existe el riesgo de rechazo inmunitario al implantar tejido completamente desarrollado, por lo que la regeneración tisular mediante este método se monitoriza con mayor rigor tras la implantación. [ 26 ]
La técnica de ingeniería de tejido muscular in vitro se utiliza para crear tejido muscular con propiedades funcionales y mecánicas más favorables. Según Carnes y Pins en Ingeniería de tejido muscular esquelético: estrategias basadas en biomateriales para el tratamiento de la pérdida muscular volumétrica, [ 26 ] este enfoque desarrolla un microambiente más propicio para mejorar la regeneración del tejido tras la implantación, restaurando así la funcionalidad completa en los pacientes.
Trabajo futuro
Las tendencias actuales en ingeniería de tejidos musculares apuntan al desarrollo de técnicas de regeneración de músculo esquelético sobre la regeneración de músculo liso o cardíaco. Una tendencia actual que se encuentra en la literatura es el tratamiento de la pérdida volumétrica de músculo (PVM) mediante técnicas de ingeniería de tejidos musculares. La PVM es el resultado de la pérdida abrupta de músculo esquelético debido a resección quirúrgica, traumatismos o lesiones de combate. [ 29 ] Se ha observado que los injertos de tejido, el plan de tratamiento actual, no restauran la funcionalidad completa ni la integridad estética en el sitio de la lesión. La ingeniería de tejidos musculares ofrece una posibilidad optimista para los pacientes, ya que las técnicas in situ, in vivo e in vitro han demostrado restaurar la funcionalidad del tejido muscular en el sitio de la herida. Los métodos que se están explorando incluyen la implantación de andamios acelulares, la implantación de andamios con células sembradas y la fabricación in vitro de injertos musculares. Los datos preliminares de cada uno de estos métodos prometen una solución para los pacientes que sufren de PVM.
Más allá de los avances tecnológicos específicos en el campo de la ingeniería de tejidos musculares, los investigadores están trabajando para establecer una conexión con el ámbito más amplio de la ingeniería de tejidos.
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