MELISA

MELISA ( Ensayo de Inmunoestimulación de Linfocitos de Memoria ) es un análisis de sangre que detecta la hipersensibilidad de tipo IV a metales, sustancias químicas, toxinas ambientales y mohos. Las reacciones de hipersensibilidad de tipo IV, en particular al níquel, están bien documentadas y pueden afectar al 20 % de la población. ^{[ 1 ]}

La prueba MELISA mide la reacción de hipersensibilidad retardada de tipo IV. Las reacciones de tipo IV están mediadas por linfocitos T (o linfocitos de memoria) que han tenido contacto previo con un alérgeno determinado. ^{[ 2 ]} Esto contrasta con la alergia de tipo I, que está mediada por anticuerpos IgE y se suele diagnosticar mediante una prueba ELISA . En individuos genéticamente predispuestos, la exposición continua a alérgenos puede inducir hipersensibilidad de tipo IV.

El ensayo MELISA es un cultivo celular que requiere linfocitos de memoria vivos. Los linfocitos se aíslan de una muestra de sangre y se cultivan en una incubadora durante cinco días. Una porción de la sangre se mantiene intacta (sin exposición a alérgenos) para servir como control negativo. Una segunda porción se expone a un alérgeno universal, la fitolaca , para servir como control positivo. Finalmente, la sangre se expone al/los alérgeno/s sospechoso/s en diferentes concentraciones, para asegurar que las condiciones in vitro sean lo más similares posible a las in vivo. La reacción de los linfocitos a cada alérgeno se mide mediante dos tecnologías distintas: una basada en la captación de un isótopo radiactivo , la timidina tritiada ( ^³H -timidina), por los linfocitos en división (proliferación); la otra mediante tinción celular y evaluación microscópica. El nivel de reactividad se mide como un Índice de Estimulación (IE), en comparación con los linfocitos vírgenes de la muestra no expuesta (control negativo). La viabilidad y la reactividad se determinan mediante recuento celular, así como mediante la reacción al control positivo. ^{[ 3 ]}

MELISA es una versión optimizada y estandarizada de la prueba de transformación linfocitaria (PTL), desarrollada a principios de la década de 1960 para ayudar a identificar alergias a fármacos, metabolitos y metales. La PTL para berilio se considera actualmente el método de referencia para el diagnóstico de la beriliosis . ^{[ 4 ]}

MELISA differs from standard LTTs in several ways:

• MELISA uses morphological screening to provide an additional level of accuracy. This ensures that non-hypersensitivity related cells (e.g. macrophages) are not included in the radioactively positive counts
• MELISA uses partially depleted monocytes to replicate the lymphocyte/monocyte balance in vivo
• MELISA utilizes a greater number of lymphocytes than other LTTs (1 million cells). As memory cells are relatively rare this higher concentration of lymphocytes ensures improved sensitivity.^[5]

MELISA was further developed to help to assess the impact of hypersensitivity to metals used in dentistry. Hypersensitivity to dental metals may be associated with local oral reactions including oral lichen planus, stomatitis and ulceration.^[6][7][8][9]

The frequency of metal-induced lymphocyte responses was examined in 3,162 dental patients in three European laboratories using the MELISA test.^[10] The patients suffered from local and systemic symptoms attributed to their dental restorations. The effect of dental metal removal was studied in 111 patients with metal hypersensitivity and symptoms resembling chronic fatigue syndrome (CFS). After consultation with a dentist, a subgroup of 111 patients who showed allergy to their dental metals replaced their restorations with non-metallic materials. Nickel was the most common sensitizer, followed by inorganic mercury, gold, phenylmercury, cadmium and palladium. As compared to lymphocyte responses in healthy subjects, the CFS group had significantly increased responses to several metals, especially to inorganic mercury, phenylmercury and gold.

Following dental metal removal:

• 76% reported long-term health improvement
• 22% reported unchanged health
• 2% reported worsening of symptoms

Type IV hypersensitivity to metals is common, particularly to nickel, however hypersensitivity related complications associated with metal implants are less frequently reported. Potential hypersensitivity complications include skin rashes, chronic joint pain, swelling, aseptic loosening, and joint failure.^[11][12]

Muchos autores concluyen que las pruebas sanguíneas basadas en LTT, como MELISA, pueden ser una mejor opción para detectar alergias sistémicas a implantes, mientras que las pruebas epicutáneas son más adecuadas para detectar hipersensibilidad dérmica. Añaden que las pruebas basadas en LTT también pueden ser una buena opción en casos de hipersensibilidad indeterminada o en pacientes con fallo articular de causa desconocida, ya que tienen mayor sensibilidad que las pruebas epicutáneas ^{[ 13 ] [ 14 ].}

Algunos cirujanos e investigadores sugieren realizar pruebas LTT antes de la cirugía en pacientes con sospecha o autoinformada alergia a metales ^{[ 15 ] [ 16 ] [ 17 ] [ 18 ].}

El titanio y su aleación principal (Ti6Al4V) se consideran generalmente opciones hipoalergénicas para artroplastias e implantes dentales. Aunque poco común, con una prevalencia estimada entre 0,6 y 6,3 %, ^{[ 19 ] [ 20 ]} se ha informado de hipersensibilidad al titanio después de la implantación con síntomas que incluyen alteración de la consolidación de fracturas, eccema local, dolor, hinchazón, dermatitis sistémica, aflojamiento del implante y fallo, todos los cuales se han reportado que se resuelven con la extracción del implante y su reemplazo por un implante que no sea de titanio ^{[ 21 ] [ 22 ] [ 23 ] [ 24 ]}

En la cirugía de columna, se encuentran partículas microscópicas de titanio en los tejidos que rodean el implante. ^{[ 25 ]} Estas partículas activan los macrófagos, lo que aumenta la reabsorción ósea y las reacciones inflamatorias. ^{[ 26 ]} Las nanopartículas liberadas circularán en los fluidos corporales, acumulándose finalmente en órganos distantes. ^{[ 27 ]}

Se ha demostrado que el titanio induce hipersensibilidad clínicamente relevante que puede detectarse con la prueba MELISA. ^{[ 28 ]} La precisión de las pruebas epicutáneas para la alergia al titanio, en particular, parece ser variable; la Clínica Mayo no encontró ninguna reacción positiva al titanio en más de una década, ^{[ 29 ]} a pesar de varios casos publicados de alergia al titanio. ^{[ 22 ] [ 30 ]}

La prueba también se utiliza para determinar si la alergia a los metales es un factor contribuyente en el desarrollo de enfermedades crónicas como el SFC (Sterzl, et al., 1999) y la esclerosis múltiple . Los autores plantean la hipótesis de que si el sistema inmunitario muestra constantemente una reacción alérgica a un metal presente en el cuerpo, esto alertará al eje HPA induciendo síntomas similares a la fatiga. Un estudio (Stejskal, et al., 1999) de 930 pacientes con síntomas similares al SFC mostró que el 62% dio positivo en la prueba MELISA para la alergia a los metales. De aquellos que eliminaron los metales causantes, el 76% mejoró, pero no hubo un grupo de control con placebo. La hipersensibilidad a los metales no es ampliamente reconocida por los investigadores como una causa aceptada del SFC o la esclerosis múltiple .

La prueba MELISA se utiliza en medicina laboral y salud ambiental. Se ha empleado para evaluar a trabajadores expuestos a metales, sustancias químicas u otros alérgenos en su lugar de trabajo. Este fue el propósito original de la prueba, desarrollada en los laboratorios de Astra (ahora Astra-Zeneca) en Södertälje, Suecia. En Estados Unidos, una técnica similar (BeLT) se utiliza de forma rutinaria para detectar la alergia al berilio en trabajadores asintomáticos expuestos al polvo de berilio (Mroz et al., 1991; Newman LS, 1996).

Si bien dos artículos concluyeron que la prueba MELISA puede dar falsos positivos (Cederbrant et al., 1999; Cederbrant et al., 1997), un estudio posterior concluyó que la prueba MELISA es "reproducible, sensible, específica y confiable para detectar la sensibilidad a metales en pacientes sensibles a metales" (Valentine-Thon y Schiawara, 2003).

Los desarrolladores de la prueba MELISA argumentan que los artículos críticos calcularon la sensibilidad y especificidad de las pruebas de proliferación de linfocitos in vitro utilizando la prueba del parche como referencia. Es bien sabido que la prueba del parche puede causar reacciones irritativas locales. En general, se acepta que las pruebas basadas en LTT como MELISA son más adecuadas para diagnosticar la sensibilidad a metales relacionada con implantes que la prueba del parche, ya que la relación entre la hipersensibilidad cutánea y la hipersensibilidad sistémica (Ständer, et al., 2017) no está bien definida. Realizar la LTT en condiciones de estimulación optimizadas podría ser una herramienta adicional útil para el diagnóstico de hipersensibilidad (Ständer, et al., 2017) (FDA, 2019). Para probar si los pacientes con síntomas atribuidos a la amalgama dental diferían de los controles sanos, un estudio comparó a 23 pacientes con amalgama, 30 sujetos que se consideraban sanos con amalgamas y 10 sujetos sin amalgama utilizando MELISA y otras pruebas. Los investigadores encontraron que se obtuvo una alta frecuencia de resultados positivos entre sujetos sanos con o sin amalgama dental, y concluyeron que la prueba no puede utilizarse como una prueba objetiva para la alergia al mercurio (Cederbrant, et al., 1999).

Otro estudio del mismo autor crítico utilizó 34 pacientes para evaluar la sensibilidad y especificidad de la prueba MELISA y concluyó que no es útil para el diagnóstico de alergia de contacto a los metales oro, paladio y níquel, ya que se obtienen muchos resultados falsos positivos (Cederbrant et al., 1997). La relevancia clínica de la prueba se ha demostrado mediante la disminución de las respuestas específicas a metales reportadas por los pacientes tras la eliminación de los metales causantes de la alergia (sin embargo, el ensayo no incluyó un grupo de control con placebo). (Stejskal et al., 2006) (Valentine-Thon et al., 2006)