Hispanopedia WikiLipofectamina o Lipofectamina 2000 es un reactivo de transfección común , producido y vendido por Invitrogen , utilizado en biología molecular y celular . [1] Se utiliza para aumentar la eficiencia de la transfección de ARN (incluidos ARNm y ARNi ) o ADN plasmídico en cultivos celulares in vitro mediante lipofección . [1] La lipofectamina contiene subunidades lipídicas que pueden formar liposomas en un entorno acuoso, que atrapan la carga útil de transfección, por ejemplo, plásmidos de ADN.
La lipofectamina consiste en una mezcla 3:1 de DOSPA (2,3-dioleoiloxi-N-[2(esperminacarboxamido)etil]-N,N-dimetil-1-propaniminio trifluoroacetato) y DOPE , [2] que forma complejos con moléculas de ácido nucleico cargadas negativamente para permitirles superar la repulsión electrostática de la membrana celular. [3] Las moléculas lipídicas catiónicas de la lipofectamina están formuladas con un colípido neutro (lípido auxiliar). [3] Los liposomas que contienen ADN (cargados positivamente en su superficie) pueden fusionarse con la membrana plasmática cargada negativamente de las células vivas, debido al colípido neutro que media la fusión del liposoma con la membrana celular, lo que permite que las moléculas de carga de ácido nucleico crucen al citoplasma para la replicación o expresión. [3]
Para que una célula exprese un transgén , el ácido nucleico debe llegar al núcleo de la célula para comenzar la transcripción . Sin embargo, es posible que el material genético transfectado nunca llegue al núcleo en primer lugar, sino que se interrumpa en algún punto del proceso de entrega . [3] En las células en división, el material puede llegar al núcleo al quedar atrapado en la envoltura nuclear que se reensambla después de la mitosis. [3] Pero también en células que no se dividen, la investigación ha demostrado que la lipofectamina mejora la eficiencia de la transfección, lo que sugiere que además ayuda al material genético transfectado a penetrar la envoltura nuclear intacta. [3]
Este método de transfección fue inventado por el Dr. Yongliang Chu. [4]
Véase también
Referencias
- ^ de Invitrogen (2012). "Reactivo Lipofectamina 2000".
- ^ Yang, J., Huang, L. Maduración dependiente del tiempo del complejo liposoma catiónico-ADN para resistencia al suero. Gene Ther 5, 380–387 (1998). https://doi.org/10.1038/sj.gt.3300596
- ^ abcdef Dalby B, Cates S, Harris A, Ohki EC, Tilkins ML, Price PJ, Ciccarone VC (junio de 2004). "Transfección avanzada con el reactivo Lipofectamine 2000: neuronas primarias, ARNi y aplicaciones de alto rendimiento". Métodos . 33 (2): 95–103. doi :10.1016/j.ymeth.2003.11.023. PMID 15121163.
- ^ US Active US7479573B2, Yongliang Chu; Malouk Masoud y Gulliat Gebeyehu, "Reactivos de transfección", asignado a Life Technologies Corp e Invitrogen Group
US Active US7479573B2, Yongliang Chu; Malek Masoud y Gulliat Gebeyehu, "Reactivos de transfección", asignado a Life Technologies Corp e Invitrogen Group