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Microscopía cicladora de imágenes

Comparación de la microscopía cicladora de imágenes de fluorescencia de dimensión ilimitada (ICM) y la microscopía de fluorescencia estándar de tres parámetros Un microscopio ci...

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Comparación de la microscopía cicladora de imágenes de fluorescencia de dimensión ilimitada (ICM) y la microscopía de fluorescencia estándar de tres parámetros

Un microscopio ciclador de imágenes (ICM) es un microscopio de fluorescencia completamente automatizado (epi) que supera el límite de resolución espectral, lo que da como resultado imágenes de fluorescencia sin parámetros ni dimensiones limitadas. El principio y el dispositivo robótico fueron descritos por Walter Schubert en 1997 [1] y se han desarrollado aún más con sus colaboradores dentro del proyecto del topónimo humano . [2] [3] [4] [5] El ICM ejecuta ciclos repetitivos de incubación-imágenes-blanqueo controlados robóticamente con bibliotecas de sondas conjugadas con tinte que reconocen estructuras objetivo in situ (biomoléculas en células fijadas o secciones de tejido). Esto da como resultado la transmisión de una cantidad aleatoriamente grande de información biológica distinta al reutilizar el mismo canal de fluorescencia después del blanqueo para la transmisión de otra información biológica utilizando el mismo tinte que está conjugado con otra sonda específica, aso De este modo, se generan imágenes de fluorescencia cuasi-multicanal con reducción de ruido y estabilidades físicas, geométricas y biofísicas reproducibles. El poder resultante de discriminación molecular combinatoria (PCMD) por punto de datos está dado por 65,536 k , donde 65,536 es el número de niveles de valores grises (salida de una cámara CCD de 16 bits), y k es el número de biomoléculas y/o subdominios co-mapeados por biomolécula(s). Se ha demostrado PCMD alto para k  = 100, [3] [5] y en principio se puede expandir para números mucho mayores de  k . En contraste con la microscopía de fluorescencia multicanal tradicional de pocos parámetros (panel a en la figura) los PCMD altos en un ICM conducen a una alta resolución funcional y espacial (panel b en la figura). El análisis sistemático de sistemas biológicos mediante ICM revela la ley de segregación supramolecular que describe el principio de orden de grandes redes biomoleculares organizadas jerárquicamente in situ (toponoma). [6] El ICM es la tecnología central para el mapeo sistemático del código de red de proteínas completo en tejidos (proyecto de toponoma humano). [2] El método ICM original [1] incluye cualquier modificación del paso de blanqueo. Se han informado modificaciones correspondientes para la recuperación de anticuerpos [7] y la extinción química del colorante [8], que han sido debatidas recientemente. [9] [10]Los sistemas de imágenes de topónimos (TIS) y los cartogramas de ligandos multiepítopo (MELC) representan diferentes etapas del desarrollo tecnológico de la microscopía de imágenes por ciclos. La microscopía de imágenes por ciclos recibió el premio al mejor artículo de la American ISAC en 2008 por el código de tres símbolos de los proteomas organizados. [11]

Citas

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Referencias

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Lectura adicional

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