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Articulo de referencia

Método de Golgi

Neurona piramidal neocortical humana teñida mediante la técnica de Golgi. Obsérvese la dendrita apical que se extiende verticalmente por encima del soma y las numerosas dendrita...

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Neurona piramidal neocortical humana teñida mediante la técnica de Golgi. Obsérvese la dendrita apical que se extiende verticalmente por encima del soma y las numerosas dendritas basales que irradian lateralmente desde la base del cuerpo celular. Fotografía de Bob Jacobs, Colorado College.
Dibujo de Camillo Golgi de un hipocampo teñido con el método del nitrato de plata.
Dibujo de una célula de Purkinje en la corteza cerebelosa realizado por Santiago Ramón y Cajal, que demuestra claramente el poder del método de tinción de Golgi para revelar detalles finos.

El método de Golgi es una técnica de tinción con plata que se utiliza para visualizar el tejido nervioso mediante microscopía óptica. Fue descubierto por Camillo Golgi , médico y científico italiano , quien publicó la primera imagen obtenida con esta técnica en 1873. [ 1 ] Inicialmente , Golgi la denominó reacción negra ( la reazione nera ), pero posteriormente se la conoció como tinción de Golgi o, más tarde, método de Golgi. Golgi lo descubrió introduciendo potasio y sodio en un embrión de pollo.

La tinción de Golgi fue utilizada por el neuroanatomista español Santiago Ramón y Cajal (1852-1934) para descubrir varios datos novedosos sobre la organización del sistema nervioso, inspirando el nacimiento de la doctrina neuronal . Posteriormente, Ramón y Cajal perfeccionó la técnica mediante un método que denominó "doble impregnación". La técnica de tinción de Ramón y Cajal, que aún se utiliza, se conoce como tinción de Cajal.

Mecanismo

Las células del tejido nervioso están densamente empaquetadas, y se puede obtener poca información sobre sus estructuras e interconexiones si se tiñen todas las células. Además, las finas extensiones filamentosas de las células neuronales, incluyendo el axón y las dendritas de las neuronas, son demasiado delgadas y transparentes para ser vistas con las técnicas de tinción normales. El método de Golgi tiñe un número limitado de células al azar en su totalidad. El mecanismo por el cual esto sucede aún es en gran parte desconocido. [ 2 ] Las dendritas, así como el soma celular, se tiñen claramente en marrón y negro y se pueden seguir en toda su longitud, lo que permitió a los neuroanatomistas rastrear las conexiones entre neuronas y hacer visible la compleja estructura de red de muchas partes del cerebro y la médula espinal .

La tinción de Golgi se logra impregnando tejido nervioso fijado con aldehído con dicromato de potasio y nitrato de plata . Las células así teñidas se llenan mediante la microcristalización del cromato de plata .

Técnica

Según SynapseWeb, [ 3 ] esta es la receta para la técnica de tinción de Golgi:

  1. Sumerja un bloque (aprox. 10x5 mm) de tejido cerebral fijado con formaldehído (o perfundido con paraformaldehído y glutaraldehído ) en una solución acuosa al 2% de dicromato de potasio durante 2 días.
  2. Seca brevemente el bloque con papel de filtro .
  3. Sumerja el bloque en una solución acuosa de nitrato de plata al 2% durante otros 2 días.
  4. Cortes de aproximadamente 20–100 μm de espesor. 
  5. Deshidratar rápidamente en etanol , aclarar y montar (por ejemplo, en Depex o Enthalan).

Esta técnica se ha perfeccionado posteriormente para sustituir el precipitado de plata por oro mediante la inmersión de la muestra en cloruro de oro y luego en ácido oxálico , seguido de la eliminación de la plata con tiosulfato de sodio . Esto preserva un mayor grado de estructura fina, con los detalles ultraestructurales marcados por pequeñas partículas de oro. [ 4 ]

La tinción de Golgi se ha realizado tradicionalmente en secciones preparadas con micrótomo , mientras que su uso en criosecciones ha sido limitado. Se desarrollaron protocolos de Golgi-Cox modificados con protección tisular mejorada para facilitar la aplicación de la criosección, manteniendo una visualización fiable de la citoarquitectura neuronal fina. [ 5 ]

Cita

Ramón y Cajal dijo del método Golgi:

Expresé la sorpresa que sentí al ver con mis propios ojos los maravillosos poderes reveladores de la reacción cromo-plata y la ausencia de cualquier entusiasmo en el mundo científico suscitado por su descubrimiento.
Recuerdos de mi vida, vol. 2, Historia de mi trabajo científico . Madrid: Moya, 1917, p. 76.

Referencias

  1. ↑ Finger, Stanley (1994). Orígenes de la neurociencia  : una historia de las exploraciones sobre la función cerebral . Oxford University Press. pág.  45. ISBN 9780195146943. OCLC 27151391 . En 1873, Golgi publicó la primera imagen breve pero "adecuada" de la reacción negra, que mostraba la célula nerviosa completa, incluyendo su cuerpo celular, axón y dendritas ramificadas. 
  2. ↑ Nicholls, JG (2001). De la neurona al cerebro . Sinauer Associates. pp . 5. ISBN  0878934391.
  3. ↑ Spacek, J., Fiala, J. (2002-06-28). "Visualización de espinas dendríticas" . SynapseWeb. Archivado del original el 26-06-2010 . Recuperado el 17-06-2010 .{{cite web}}: CS1 maint: varios nombres: lista de autores ( enlace )
  4. ↑ "Inicio – Springer" .
  5. ↑ Zhong, Feng; Liu, Lei; Wei, Jia-Li; Dai, Ru-Ping (19 de junio de 2019). " Tinción de Golgi-Cox paso a paso para criosección" . Frontiers in Neuroanatomy . 13 62. doi : 10.3389/fnana.2019.00062 . ISSN 1662-5129 . PMC 6593295. PMID 31275118 .   
  • Microfotografía de una célula cortical teñida con la tinción de Golgi. Archivada el 22/05/2012 en Wayback Machine . Galería de imágenes de IHC.
  • Impregnaciones de Golgi . Imágenes del cerebro de las moscas.
  • Visualización de espinas dendríticas mediante el método de Golgi . SynapseWeb. Incluye un estudio de impregnación del aparato de Golgi en cámara rápida.
  • Berrebi, Albert: Biología celular de las neuronas: estructura y métodos de estudio . (en PDF)
  • Imágenes de cortes cerebrales teñidos que incluyen las "neuronas teñidas con Golgi" del proyecto BrainMaps.