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ARNip preparado con endorribonucleasa

Los siRNA o siRNA preparados con endorribonucleasa son una mezcla de oligonucleótidos de siRNA resultantes de la escisión de ARN bicatenario largo ( dsRNA ) con una endorribonuc...

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Los siRNA o siRNA preparados con endorribonucleasa son una mezcla de oligonucleótidos de siRNA resultantes de la escisión de ARN bicatenario largo ( dsRNA ) con una endorribonucleasa como la RNasa III de Escherichia coli o Dicer . [ 1 ] [ 2 ]

Un concepto alternativo al uso de siRNA sintetizado químicamente para la interferencia de ARN ( ARNi ) es la digestión enzimática de ARN largos de doble cadena in vitro. En este caso, una plantilla de ADNc se amplifica mediante PCR y se marca con dos secuencias promotoras de bacteriófagos. A continuación, se utiliza la ARN polimerasa para generar ARN largos de doble cadena homólogos al ADNc del gen diana. Este ARN se digiere posteriormente con la ARNasa III de Escherichia coli para generar fragmentos cortos superpuestos de siRNA con una longitud de entre 18 y 25 pares de bases. Esta mezcla compleja de ARN cortos de doble cadena es similar a la mezcla generada por la escisión de Dicer in vivo y, por lo tanto, se denomina siRNA preparado con endorribonucleasa o esiRNA corto. Los esiRNA son una mezcla heterogénea de siRNA que se dirigen a la misma secuencia de ARNm. Estos múltiples desencadenantes de silenciamiento dan lugar a un silenciamiento génico altamente específico y eficaz. [ 2 ]

Referencias

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  2. 1 2 Kittler, R; Pelletier, L (2004). "Un cribado de siRNA preparado con endorribonucleasa en células humanas identifica genes esenciales para la división celular". Nature . 432 (7020): 1036– 1040. Bibcode : 2004Natur.432.1036K . doi : 10.1038/nature03159 . PMID 15616564 . S2CID 4372785 .  
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  • esiRNA para la detección de ARN de interferencia en células de mamíferos
  • Producción de ARN de interferencia cortos (esiRNA) preparados mediante endorribonucleasa para el silenciamiento génico específico y eficaz en células de mamíferos.