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Articulo de referencia

Digoxigenina

23 H 34 O 5 \n| MolarMass=390.51 g/mol\n| Appearance=\n| Density=\n| MeltingPt=\n| BoilingPt=\n| Solubility=\n| LogP = 2.57510 {{Cite web|url=https://www.chemsrc.com/en/cas/1672...

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La digoxigenina ( DIG ) es un esteroide que se encuentra exclusivamente en las flores y hojas de las plantas Digitalis purpurea , Digitalis orientalis y Digitalis lanata (dedaleras), donde se une a azúcares para formar los glucósidos (por ejemplo, digoxina , lanatósido C ). [ 2 ]

Usos en biotecnología

La digoxigenina es un hapteno , una molécula pequeña con alta antigenicidad , que se utiliza en muchas aplicaciones de biología molecular, al igual que otros haptenos populares como el 2,4-dinitrofenol , la biotina y la fluoresceína . Normalmente, la digoxigenina se introduce químicamente ( conjugación ) en biomoléculas (proteínas, ácidos nucleicos) para su detección en ensayos posteriores. La K d de la interacción digoxigenina-anticuerpo se ha estimado en ~12 nM [ 3 ] (en comparación con K d ~0,1 pM para la interacción biotina-estreptavidina [ 4 ] ).

Proteínas de unión a DIG

Tinberg et al. diseñaron proteínas artificiales que se unen a DIG. Su mejor ligando, DIG10.3, era una proteína de 141 aminoácidos que se unía a DIG con una constante de disociación (K d ) de 541 (+/- 193) pM. [ 5 ]

Los anticuerpos antidigoxigenina de alta afinidad y especificidad se utilizan en diversos inmunoensayos biológicos (por ejemplo, ELISA ). Estos anticuerpos se marcan con colorantes, enzimas o fluorescencia, de forma directa o secundaria, para su visualización y detección.

La digoxigenina es, por lo tanto, una inmunomarca de uso general y, en particular, un marcador inmunohistoquímico estándar para la hibridación in situ . [ 6 ] [ 7 ] En este caso, se conjuga con una sola especie de nucleósido trifosfato de ARN (típicamente uridina ), que luego se incorpora al ARN (una " ribosonda ") a medida que es sintetizado por la maquinaria celular.

Permite hacer  :

  • Sondas de hibridación in situ sensibles y no radiactivas para detectar ácidos nucleicos en plantas, capaces de detectar 1  μg de ADN plasmídico. [ 8 ]
  • conjugados péptido-DIG, es decir, ensayo de bradicinina mediante inmunoensayos de quimioluminiscencia muy sensibles. [ 9 ]
  • trazadores fluorescentes y marcados con DIG para inmunoensayos competitivos, es decir, para limitar la detección de digoxina, un fármaco utilizado para curar la arritmia cardíaca, hasta 0,2  ng mL −1 . [ 10 ]
  • La digoxigenina puede conjugarse con azúcares para estudiar eventos de glicosilación , [ 11 ] incluso en sistemas biológicos.

Véase también

Referencias

  1. ↑ "Digoxigenina" . Hoja de datos de seguridad del material . ChemSrc.
  2. ↑ Polya G (2003). Biochemical Targets of Plant Bioactive Compounds . Nueva York: CRC Press. ISBN 978-0-415-30829-8.
  3. ↑ Tetin SY, Matayoshi ED (agosto de 2002). "Medición de la afinidad de anticuerpos y realización de inmunoensayos a nivel de molécula única". Analytical Biochemistry . 307 (1): 84– 91. doi : 10.1016/S0003-2697(02)00011-8 . PMID 12137783 . 
  4. ↑ Duan X (2012). "Cuantificación de las afinidades y la cinética de las interacciones proteicas mediante biosensores de nanocables de silicio" . Nature Nanotechnology . 7 (6): 401– 407. Bibcode : 2012NatNa...7..401D . doi : 10.1038/nnano.2012.82 . PMC 4180882. PMID 22635097 .  
  5. ↑ Tinberg CE, Khare SD, Dou J, Doyle L, Nelson JW, Schena A, Jankowski W, Kalodimos CG, Johnsson K, Stoddard BL, Baker D (septiembre de 2013). "Diseño computacional de proteínas de unión a ligandos con alta afinidad y selectividad" . Nature . 501 ( 7466): 212–216 . Bibcode : 2013Natur.501..212T . doi : 10.1038/nature12443 . PMC 3898436. PMID 24005320 .  
  6. ^ Eisel D, Grünewald-Janho S, Krushen B, eds. (2002). Manual de aplicación DIG para hibridación in situ no radiactiva (3ª ed.). Penzberg: Roche Diagnóstico. 
  7. ↑ Hauptmann G, Gerster T (agosto de 1994). "Hibridación in situ de montaje completo de dos colores en embriones de vertebrados y Drosophila". Trends in Genetics . 10 (8): 266. doi : 10.1016/0168-9525(90)90008-T . PMID 7940754 . 
  8. ↑ Hart SM, Basu C (abril de 2009). "Optimización de un sistema de inmunoensayo basado en digoxigenina para la detección de genes en Arabidopsis thaliana" . Journal of Biomolecular Techniques . 20 (2): 96– 100. PMC 2685603. PMID 19503620 .  
  9. ↑ Décarie A, Drapeau G, Closset J, Couture R, Adam A (1994). "Desarrollo de péptidos marcados con digoxigenina: aplicación al inmunoensayo quimioluminiscente de bradiquinina en tejidos inflamados". Peptides . 15 (3): 511– 8. doi : 10.1016/0196-9781(94)90214-3 . PMID 7937327 . S2CID 19210640 .  
  10. ↑ Mayilo S, Ehlers B, Wunderlich M, Klar TA, Josel HP, Heindl D, Nichtl A, Kürzinger K, Feldmann J (julio de 2009). "Inmunoensayo homogéneo competitivo de digoxigenina basado en la extinción de fluorescencia por nanopartículas de oro". Analytica Chimica Acta . 646 ( 1–2 ): 119–22 . Bibcode : 2009AcAC..646..119M . doi : 10.1016/j.aca.2009.05.023 . PMID 19523564 . 
  11. ↑ Goodarzi MT, Rafiq M, Turner G (mayo de 1995). "Un inmunoensayo multipocillo mejorado que utiliza lectinas marcadas con digoxigenina para estudiar la glicosilación de glicoproteínas purificadas". Biochemical Society Transactions . 23 (2): 168S. doi : 10.1042/bst023168s . PMID 7672194 .